97±1.53)%, Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后恢复为(25.34±1.79)%。(6) Western Blot检测发现,热诱导后Tca8113细胞磷酸化Akt2(p-Akt2)(Phospho-Ser474)相对表达量由(0.50±0.09)降为(0.10±0.04)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(0.43±0.08), Mig+Akt抑制剂+热诱导联合后降至(0.27±0.04)。热诱导后Tca8113细胞磷酸化eIF4E(p-eIF4E)(Phospho-Ser209)的相对表达量由(0.45±0.05)降为(0.16±0.02)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(0.39±0.04),Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后降至(0.21±0.04)。热诱导后Tca8113细胞Bcl-2相对表达量由(1.20±0.06)降为(0.51±0.07)(p=0.000), Mig+热诱导联合处理后恢复为(1.30±0.12), Mig+Akt抑制剂+热诱导联合处理后为(1.03±0.10)。 AT7519 [结论]趋化因子Mig通过拯救Akt信号通路的活性,促进eIF4E的磷酸化,上调抗凋亡基因Bcl-2的表达,抑制热诱导口腔舌鳞癌Tca8113细胞凋亡发生,介导肿瘤细胞耐热。
[研究背景和目的]

肿瘤细胞脱离原发灶或转移灶进入血液系统形成循环肿瘤细胞(circulating tumor cells, CTCs)。CTCs的发现迄今已有一百多年的历史,并且一直被看作是肿瘤复发和转移的根源。进入血液循环的大多数肿瘤细胞都发生了失巢凋亡,只有少部分得以存活下来。面对极其复杂的机体环境,CTCs是通过何种方式生存下来,又是何种原因促进其获得了凋亡抵抗能力尚不完全清楚。近年来研究显示,白介素-8(interleukin-8, IL-8),又称CXCL8,不仅能够促进肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移及肿瘤血管生成,还能激活细胞内多条生存通路,抑制细胞内凋亡信号。本研究旨在探讨CXCL8与结直肠癌细胞失巢凋亡的关系,分析CXCL8促进结直肠癌细胞抵抗失巢凋亡的分子机制,寻找并试图阻断CXCL8介导的促细胞生存信号的关键靶点,同时检测结直肠癌组织中CXCL8及其下游靶蛋白的表达情况,评价其临床意义,为建立降低结直肠癌复发、转移的新策略提供新的思路。

[研究方法] 1.CXCL8促进肠癌细胞抵抗失巢凋亡的体外研究 (1)失巢凋亡模型构建：应用聚羟乙基异丁烯酸(Poly-HEMA)包被培养板阻止细胞贴壁,将肠癌细胞悬浮培养,模拟肠癌细胞的失巢状态。 (2)CXCL8的表达与肠癌失巢凋亡敏感性的研究：应用免疫荧光技术、RT-PCR和Western blot检测多种肠癌细胞系内CXCL8的表达水平。应用FITC-AnnexinV/PI双染法分选凋亡细胞,流式细胞术检测不同时间点贴壁和失巢肠癌细胞的凋亡改变,分析CXCL8与肠癌细胞失巢凋亡敏感性的相关性。 (3)CXCL8对肠癌细胞失巢凋亡的影响：以不同浓度的CXCL8分别作用于肠癌细胞系SW480、Caco2,72h后应用AnnexinV-FITC染色试剂盒及流式细胞仪检测肠癌细胞凋亡率的变化,应用噻唑蓝(MTS)实验检测CXCL8作用后失巢和贴壁肠癌细胞的增殖率,应用Western blot检测细胞内凋亡相关蛋白caspase-3和Bc12的表达,初步探讨CXCL8诱导失巢凋亡的机制。再次应用最佳浓度的CXCL8作用于肠癌细胞Lovo、HT29和HCT116,于48h后再次检测细胞凋亡改变,确定CXCL8对肠癌细胞失巢凋亡抵抗的诱导效应。 什么 2.CXCL8诱导肠癌细胞失巢凋亡抵抗分子机制的研究 PF-477736细胞系 (1)Western blot检测CXCL8作用组和空白组肠癌细胞SW480和Caco2内T-AKT、P-AKT、T-ERK、P-ERK、TOPK表达的改变。 (2)抑制试验：在加入CXCL8前预先用AKT抑制剂MK2206和ERK1/2抑制剂U0126处理肠癌细胞,应用流式细胞仪FITC-AnnexinV/PI双染法检测肠癌细胞凋亡率,应用Western

blot检测细胞内T-AKT、P-AKT、T-ERK、P-ERK和TOPK表达的改变。 (3)干扰试验：在CXCL8作用前,分别应用AKT siRNA、TOPK siRNA、 ERK siRNA敲除细胞内AKT、TOPK和ERK基因,应用Western blot检测相关信号蛋白表达的改变,应用流式细胞仪FITC-AnnexinV/PI双染法检测肠癌细胞凋亡率。 3.CXCL8和TOPK在结直肠癌组织中表达的临床意义研究 (1)免疫组织化学检测肠癌组织及其配对的正常组织内的CXCL8和TOPK的表达。 (2)分析CXCL8与TOPK表达的相关性及二者表达与肠癌临床病理的相关性。 (3)CXCL8与TOPK表达和肠癌患者生存的相关性。 [研究结果] 1、CXCL8促进肠癌细胞抵抗失巢凋亡的体外实验 (1)在肠癌细胞系内源性CXCL8表达水平与其失巢凋亡敏感性呈负相关,与其贴壁细胞生长凋亡无关。 (2)外源性CXCL8能够促进肠癌细胞系抵抗失巢凋亡。 (3)CXCL8激活了细胞内PI3K/AKT和ERK1/2信号通路,上调了Bcl2的表达,促进肠癌细胞抵抗失巢凋亡。 (4)TOPK是PI3K/AKT与ERK之间的对话参与肠癌细胞的失巢凋亡抵抗。 2、肠癌组织表达CXCL8和TOPK的临床研究结果 (1)CXCL8和TOPK在肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织(x2=53.281,P=0.000；x2=372.000,P=0.000)。 (2)在肠癌组织中,CXCL8和TOPK的表达呈正相关(r=0.254,P=0.000)。 (3)在肠癌组织中,CXCL8表达与肠癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肝转移相关(P<0.05),TOPK表达与肠癌发生部位、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及肝转移、血清CEA水平相关(P
目的：通过下调RABEX-5在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达，在体外观察RABEX-5表达下调后对乳腺癌细胞株MCF-7增殖、转移的影响以及MCF-7对蒽环类药物和紫杉类药物的敏感性变化。并通过体内试验进一步验证RABEX-5对乳腺癌增殖、转移的影响，初步探讨其作用机理。 方法：通过转染RABEX-5慢病毒载体已成功获得了RABEX-5下调表达的稳定细胞株(MCF-7/KD)及其阴性对照细胞株(MCF-7/NC)。应用克隆形成实验和细胞划痕实验，分别检测RABEX-5下调后对MCF-7细胞株增殖和转移的影响；应用cck-8方法检测RABEX-5沉默后，与其阴性对照相比对化疗药物敏感性的变化情况。在体内试验，通过裸鼠成瘤实验，进一步验证RABEX-5下调后对乳腺癌增殖、转移的作用及相关信号分子的表达。 结果：RABEX-5在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达下调后，MCF-7细胞的克隆形成能力及细胞迁移能力明显降低（P0.