5, 85, 170mg·kg~(-1))和阳性对照秋水仙碱组(Col 0.1 mg?kg~(-1))。HE染色和Masson染色对肝脏组织作病理检查。分光光度法检测血清中转氨酶活性和肝匀浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、羟脯氨酸(Hyp)含量;放免法检测血清中透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(CIV)和层粘蛋白(LN)、前列腺素E2(PGE2)水平;MTT法检测HSC增殖情况;放射性免疫法测定HSC-T6 cAMP水平;采用Western blot技术检测HSC-T6中COX-2、Gαs、Gαi~(-1)、Gαi-2、Gαi-3蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平的变化。 结果: 1. SQDG对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠的保护作用

SQDG对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠具有明显的保护作用。结果表明,SQDG(85, 170mg·kg~(-1))能显著降低猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠升高的肝、脾指数,对升高的血清转氨酶有降低趋势,但无显著性意义;病理组织学检查发现,SQDG可降低猪血清诱导的肝纤维化大鼠的纤维化程度,与模型组相比,纤维沉积、肝小叶的破坏等均有所减轻。SQDG还可显著降低纤维化大鼠肝组织Hyp含量,降低血清中HA、LN、PCIII和CIV含量,提示SQDG可以减少纤维化大鼠ECM的生成。 很少 所以 进一步研究发现,SQDG显著降低肝纤维化大鼠肝匀浆中MDA的含量,升高抗氧化酶SOD、GSH-Px活性,改善肝脏氧化状态,还能显著降低肝纤维化大鼠血清中升高的炎性细胞因子PGE2的产生。体外分离大鼠HSC检测其增殖情况,结果表明SQDG可以显著抑制HSC的增殖,SQDG还可以明显抑制模型组肝脏升高的PDGFR-β的表达。提示:抑制氧化应激和致纤维化炎性细胞因子的产生,抑制PDGFR-β的表达从而抑制HSC增殖可能是SQDG抗肝纤维化的部分机制。

2. SQDG对免疫性肝纤维化大鼠MAPK相关蛋白磷酸化和G蛋白表达的影响 在猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型大鼠中,肝组织ERK1/2、p38和JNK磷酸化程度增加,肝组织中Gαs的表达明显降低,Gαi-2和Gαi-3的表达明显增加,而Gαi~(-1)的表达没有明显变化。给予SQDG可以明显抑制免疫性肝纤维化大鼠肝组织ERK1/2、p38和JNK磷酸化程度,SQDG还可以明显促进Gαs的表达,抑制Gαi-2和Gαi-3的表达。提示影响MAPK和G蛋白通路的变化可能是SQDG发挥抗肝纤维化作用的重要机制之一。 selleck kinase抑制剂 3. Pae对rrPDGF-BB刺激HSC-T6增殖的影响 体外建立rrPDGF-BB诱导的HSC-T6增殖模型,结果表明Pae在12.5～200mg?L~(-1)浓度范围内明显抑制HSC-T6增殖。进一步观察COX-2在rrPDGF-BB刺激HSC-T6增殖中的作用,结果表明rrPDGF-BB刺激可引起COX-2表达量持续增加,选择性的COX-2抑制剂NS-398可以明显抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6增殖。Pae(50,

100 mg·L~(-1))可以明显抑制rrPDGF-BB引起的HSC-T6 COX-2表达增加。结果提示抑制COX-2的表达可能是Pae抑制HSC-T6增殖的作用机制之一。 4. Pae对rrPDGF-BB刺激的HSC-T6 ERK1/2信号通路活化的影响 Western-blot检测发现,rrPDGF-BB刺激HSC-T6可引起ERK1/2的迅速磷酸化, Pae(25, 50, 100 mg·L~(-1))可以抑制rrPDGF-BB引起的HSC-T6 ERK1/2的激活,降低p-ERK1/2水平。提示抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6 ERK1/2信号通路的活化是Pae抑制其增殖的主要机制之一。 5. rrPDGF-BB刺激下HSC-T6 G蛋白-AC-cAMP通路的改变及Pae的作用 应用Western-blot方法,检测rrPDGF-BB(50μg·L~(-1))刺激HSC-T6中G蛋白-AC-cAMP通路的改变。结果发现,rrPDGF-BB可以明显促进Gαi~(-1)和Gαi-2蛋白表达水平,但对Gαi-3和Gαs表达无明显影响。同时,rrPDGF-BB可以降低细胞内cAMP水平和PKA活性,促进HSC-T6增殖。Pae(50, 100mg?L~(-1))可明显抑制rrPDGF-BB引起的Gαi~(-1)、Gαi-2的表达升高,提高细胞内cAMP水平。且相关性与回归分析结果表明Pae抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6增殖反应与其提高HSC-T6内cAMP水平密切相关。提示下调HSC-T6 Gαi蛋白的表达是Pae抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6过度增殖的重要机制之一。 6.