410±0.052 vs 0.264±0.035,P
研究背景： 随着心脏移植、冠状动脉搭桥以及经皮冠脉介入等治疗手段广泛地应用于临床,心肌缺血再灌注损伤已成为临床上常见的一种病理生理现象。细胞凋亡在心肌缺血后即触发并因再灌注而加重,减少缺血和再灌注过程中心肌细胞凋亡可以挽救更多的心肌,提高心肌缺血后再灌注治疗的效果。 血红素氧合酶1(HO-1),是血红素氧合酶的诱导型,研究表明HO-1被诱导适应性表达能发挥抗细胞凋亡的作用。多种因素可通过信号转导通路ERK1/2或PI3K/Akt激活并促使红细胞系核因子-2相关因子-2(Nrf2)向核内转位、并与细胞核内抗氧化反应元件(ARE)上相应位点相互作用,上调HO-1的表达与酶活力,减轻各种应激状态下组织细胞的损伤。 IPI-145浓度 羟基红花黄素A (HSYA)是药用植物红花的最主要的有效成分。研究发现,HSYA可以减轻组织细胞的缺血再灌注损伤,可以抑制低氧诱导的内皮细胞凋亡目前尚未见到有关HSYA对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的影响及其机制的研究报道。本研究探讨HSYA对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其分子机制,分两部分进行。 第一部分羟基红花黄素A上调血红素氧合酶-1的表达抑制缺氧／复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡

目的： 利用体外细胞缺氧/复氧(A/R)模拟体内组织细胞缺血再灌注诱导H9c2心肌细胞凋亡,给予HSYA干预,探讨其对A/R诱导的心肌细胞凋亡的影响和其分子机制。 方法： H9c2心肌细胞随机分为对照组、A/R组、A/R并给予不同剂量(1、5、20、80μM) HSYA干预组,MTT法检测各组H9c2心肌细胞活力,酶联免疫分析法检测各组H9c2心肌细胞上清液肌钙蛋白Ⅰ浓度,蛋白免疫印迹技术测定各组H9c2心肌细胞HO-1蛋白表量。然后用随机分成的对照组、A/R组、A/R并给予HSYA20μM干预组、HO-1抑制剂(ZnPP-Ⅸ)组继续进一步的实验,测定各组H9c2心肌细胞的HO-1酶活力,FITC-Annexin

V/PI双染流式细胞术检测各组H9c2心肌细胞的凋亡率,蛋白免疫印迹技术测定各组H9c2心肌细胞HO-1蛋白表量、裂解的caspase-3 (CC3)表达量和细胞线粒体Bcl-2/Bax比值。 结果： 1.HSYA提高了经历A/R的H9c2心肌细胞的活力。 2. HSYA减轻了经历A/R的H9c2心肌细胞的损伤。 3. HSYA上调了经历A/R的H9c2心肌细胞的HO-1表达。 4. ZnPP-Ⅸ对HSYA上调经历A/R的H9c2心肌细胞的HO-1表达的作用没有明显影响。 Fulvestrant 5. HSYA上调经历A/R的H9c2心肌细胞HO-1的酶活力被ZnPP-Ⅸ抑制。 6. HSYA抗A/R诱导H9c2心肌细胞凋亡的作用被ZnPP-Ⅸ部分消除。 7. ZnPP-Ⅸ部分地消除了HSYA上调经历A/R的H9c2心肌细胞线粒体Bcl-2/Bax比值的作用。 8. ZnPP-Ⅸ部分地消除了HSYA降低经历A/R的H9c2心肌细胞CC3表达量的作用。 结论： HSYA通过上调HO-1的表达量和酶活力抑制A/R诱导的H9c2心心肌细胞凋亡从而减轻了细胞损伤。 第二部分羟基红花黄素A上调经历缺氧/复氧的H9c2心肌细胞血红素氧合酶-1的表达的信号转导通路 目的： 紧接着第一部分的研究工作,利用体外A/R模拟体内缺血再灌注诱导H9c2心肌细胞凋亡,并给予HSYA干预,探讨HSYA在抗A/R诱导的心肌细胞凋亡作用中上调HO-1表达的细胞信号转导通路机制。 方法： H9c2心肌细胞随机分为对照组、A/R组、HSYA 20μM干预组、HO-1抑制剂组,蛋白免疫印迹技术测定各组H9c2心肌细胞p-ERK1/2,

p-Akt蛋白表量。然后用随机分成的对照组、A/R组、HSYA 20μM干预组、P13K抑制剂(LY294002)组继续进一步的实验,蛋白免疫印迹技术测定各组H9c2心肌细胞p-Akt、HO-1、CC3蛋白表量和各组H9c2心肌细胞核蛋白中Nrf2的量。 结果： 1. HSYA和ZnPP-IX对经历A/R的H9c2心肌细胞的ERK1/2的磷酸化没有明显影响。 2. HSYA促进经历A/R的H9c2心肌细胞Akt磷酸化而ZnPP-Ⅸ对HSYA增强H9c2心肌细胞Akt磷酸化的作用没有明显影响。 3. HSYA促进经历A/R的H9c2心肌细胞Akt磷酸化的作用被LY294002阻断。 4.LY294002部分地阻断了HSYA上调经历A/R的H9c2心肌细胞HO-1表达的作用,并显著地削弱了HSYA降低经历A/R的H9c2心肌细胞CC3表达量的作用。 没有 5. HSYA促进经历A/R的H9c2心肌细胞Nrf2向核内转位的作用被LY294002部分阻断。 结论： HSYA减轻细胞损伤可能机制之一是通过激活PI3K/Akt信号转导通路,促使核因子Nrf2转位于细胞核内,与抗氧化反应元件上相应位点相互作用,从而上调血红素氧合酶1的表达和活性。
本研究以不同发育阶段的白刺参和青刺参为研究材料,利用生物学、组织学、分子生物学方法,对白刺参和青刺参进行比较研究。从生物学、组织学和分子生物学角度,综合探讨了刺参白化特征的发生机理。 1.白刺参体壁的基本营养成分(水分、灰分、粗蛋白、总脂肪、总糖)较青刺参无差异。青刺参成体体壁中黑色素含量约为白刺参的16倍,青刺参成体体壁中黑色素含量为干重的3.12%,而白刺参成体体壁中黑色素含量仅为干重的0.24%。在受精后第25、32、39、46、53天的稚参中,青刺参的黑色素含量较白刺参无显著差异。在受精后第60、74、81、88天的稚参中,青刺参的黑色素含量均显著高于白刺参。可见,刺参体壁黑色素的缺乏是导致刺参白化发生的直接原因。 2.刺参成体体壁由角质层(cuticle)、表皮层(epidermis)和内皮层(dermis)构成。相对于青刺参,白刺参成体体壁的黑色素细胞明显较少;白刺参成体体壁黑色素细胞中黑色素体的密度明显较小,且部分黑色素体为未有黑色素沉积的黑色素前体(pre-melanosome)。刺参稚参体壁已形成清晰的角质层(cuticle),表皮层(epidermis)和内皮层(dermis)结构。相对于青刺参,白刺参稚参体壁仅存在极少的黑色素细胞。白刺参稚参体壁黑色素细胞中黑色素体的发育程度极低,几乎不存在发育成熟的黑色素体,大多黑色素体为未有黑色素沉积的黑色素前体(pre-melanosome)。可见,黑色素细胞的缺乏及黑色素体中黑色素沉积的缺乏是刺参白化发生的组织学特征。 3.