第一部分下调Cav-1可抑制辐射诱导下EGFR入核并使三阴乳腺癌细胞放射增敏 目的辐射诱导后人窖蛋白(Caveolin-1, Cav-1)介导的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)入核是放疗抵抗的重要原因。在这项研究中,我们旨在初步明确Cav-1在基底样三阴乳腺癌(triple negative breast 很少cancer, TNBC)细胞株中的特定表达及其在细胞放射抵抗生物学中的作用,并确定是否下调Cav-1的表达后会阻碍基底样三阴乳腺癌细胞株辐射诱导下的EGFR入核过程从而引起放疗增敏。 方法利用免疫印迹实验(western blotting, WB)观察四株乳腺癌细胞株(MDA-MB-231, BT474, SKBR3和Hs578T)中EGFR, 查找更多Cav-1和HER-2的表达情况。对Cav-1表达水平不同的细胞株进行克隆形成实验确定其内在放疗敏感性。选择两株Cav-1高表达的基底样三阴乳腺癌细胞株(MDA-MB-231和Hs578T)进行放射治疗(radiation therapy, RT)后2小时之内不同时间点的胞浆胞核蛋白分离提取,分别用WB和免疫荧光共聚焦检测EGFR入核情况。之后采用CP-868596小分子RNA干扰技术(small interfering RNA, siRNA)下调Cav-1的表达,利用WB和免疫荧光共聚焦观察EGFR入核受阻的现象；同时进行克隆形成实验观察细胞放疗前转染Cav-1siRNA与否对放疗后细胞存活分数(survival fraction, SF)即放疗敏感性的影响。 结果在四株乳腺癌细胞株中,HER-2阴性的基底样乳腺癌细胞具有Cav-1高表达的现象,这类细胞常同时伴随EGFR的阳性表达。

2.为了将这种能够更精确计算结合能的方法用于寻找先导化合物的实践工作中，我们按照兼顾效率和准确性的原则，发展了一套逐级虚拟筛选的策略，并以传统抗癌靶点——微管蛋白作为研究对象来检验该策略的实用性。针对秋水仙素结合位点，逐级虚拟筛选方法从超过100000个不同的类药性分子中产生了63个候选化合物，我们从中挑选出9个结构相似、预测作用模式相同的化合物进行实验验证那个，5个分子被确认为阳性化合物，进一步的构效关系研究验证了计算预测的作用模式。同时，先导化合物在细胞水平上有抑制肿瘤细胞增殖的能力，并且证明能作用于秋水仙素位点。 3.我们进一步发展了组合虚拟筛选的方法来寻找多靶标配体分子，以BCR-ABL融合蛋白作为研究对象，针对ATP结合位点寻找能够同时抑制野生型和耐药型（T315I突变）的ABL那个激酶抑制剂。从组合虚拟筛选自动产生的18个共有噻吩母核结构的化合物中，我们挑选出9个作用模式相同的候选分子进行实验验证，3个化合物被证明有明显的双抑制活性。和正常的Ba/F3细胞系相比，先导化合物能够显著抑制ABL（野生型和耐药型）驱动的细胞增殖，同时对其他肿瘤细胞系也都有一定的抑制作用。 4.在以上两个不同靶点（微管蛋白和ABL激selleckchem酶）的筛选结果中，有相同先导化合物被证实为双靶标配体分子。在该基础上，我们发现了ATP结合位点和秋水仙素位点在口袋形状和与小分子的作用模式上存在很大的相似性，而这种特征是传统的基于比对的结构分析方法很难揭示的。
目的：异常的血管生成,包括内皮细胞激活、降解基底膜、内皮细胞的定向运动和增殖、新生微血管、内皮细胞新的基底膜合成、血管腔产生、芽式生长并形成血管襟等一系列步骤,是肿瘤细胞增殖,侵袭和转移的先决条件。

Id1参与各种细胞的生长、发育、成熟和死亡等调控过程,其组成性表达不仅促进细胞增殖,还会抑制细胞的分化,因而Id1在细胞中过度表达与细胞的恶性生长密切相关。目前已报道,Id1在多种肿瘤组织中呈现高表达状态,而且与肿瘤的恶性程度相关。 目的本研究通过荧光实时定量PCR法和免疫组织化学法分别检测患者卵巢ROCK抑制剂良、恶性组织中Idl mRNA和蛋白的表达,并分析Id1表达与肿瘤组织恶性程度和患者预后的关系,分别从基因转录和蛋白水平明确Id1检测对卵巢癌进行辅助诊断的临床意义。 方法我们分别用荧光实时定量逆转录-聚合酶链反应(real time reverse transcripti查找更多on-polymerase chain reaction, real time RT-PCR),检测Idl mRNA在人良性卵巢囊肿和卵巢癌组织中的相对定量,分析Idl mRNA的含量变化与卵巢良、恶性病变、细胞分化和预后的关系；并进一步利用免疫组织化学技术,检测Id1蛋白Gefitinib体外在卵巢子宫内膜样癌和良性卵巢巧克力囊肿组织中Id1蛋白的表达,分析Id1蛋白表达变化与卵巢上皮恶性病变的关系。 结果：Idl mRNA在卵巢癌组织中的含量明显高于良性卵巢囊肿组织(P<0.01)。卵巢癌组织分化低和恶性度高的组织IdlmRNA的表达量明显高于分化高或恶性程度低的组织(P<0.01)。高IdlmRNA表达和患者预后呈显著相关(P<0.01)。

HGF/c-MET信号通路的靶向治疗将会对这些肿瘤有效。本文对近几年来HGF/c-MET信号通路的研究进展,包括该信号通路的基本信息、在相关肿瘤中的作用、临床治疗进展和遇到的困难以及相关对策进行综述。
非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCSorafenib 价格LC)是造成人类死亡最多的恶性肿瘤之一,其五年生存率一直徘徊在20%以下。自肺癌领域首个分子靶向药物吉非替尼上市以来,靶向药物因其低毒、高效、便于给药的临床特点,己逐渐成为治疗NSCLC的重要选择之一。因此,筛选和证实肿瘤驱动基因已经成为未来靶向药物研KRX-0401细胞系发的重中之重。近来,越来越多的学者把焦点转移到ROS1融合基因上,并且已经有相关数据及研究表明ROS1融合基因被证实为NSCLC新的有潜力的治疗靶点,因此我们现就ROS1融合基因在NSCLC中的相关研究进展做一综述。
进展期胃癌及胃食管连接部(gas可能troesophageal junction,GEJ)腺癌的预后差。与最佳支持治疗相比,化疗能够延长患者生存期,改善生存质量,但单纯化疗患者中位生存期(median survival)仅为7~10个月。近年随着对胃癌发病分子机制的深入了解,多种靶向关键信号传导途径的分子靶向治疗药物进行了国际多中心临床研究,改变了胃癌的治疗模式。

4. Western blot结果表明：上调UHRF2后,在HEK293和L02正常细胞中H3K9ac蛋白表达增多,而在HepG2肝癌细胞中H3K9ac蛋白表达减少。同时免疫组织化学结果表明：H3K9ac蛋白在高表达UHRF2的肝癌组织较低表达UHRF2的肝癌组织少。结论UHRF2通过其PHD结构域与H3K9ac相互作用。在HepG2肝癌细胞中,过表达UHRF2下调H3K9ac蛋白的表达水平FK228分子重量。UHRF2调节H3K9ac的分子机制有待进一步研究。
目的 研究曲古菌素A（TSA）与aPKC_ι（非典型蛋白激酶C-iota）的相互作用及对胆管癌细胞的影响。 方法 本实验在细胞层面探讨TSA作用于胆管癌细胞系QBC939，从而对胆管癌细胞的凋亡产生的影响，应用流式细胞技术检测TSA在不同的时间及浓度梯度时胆管癌细胞的凋亡率的变化，同时应用Real time-寻找更多PCR技术检测aPKC_ι在相应浓度及时间梯度下的表达变化。 结果 成功建立TSA诱导胆管癌细胞凋亡模型，在流式细胞分析技术下，胆管癌细胞QBC939凋亡率随着TSA药物浓度的增加凋亡率明显增加，随着TSA作用时间的增加凋亡率同样明显增加，同时Real time PCR检测aPKC_ι的表达量与TSA作用时间及药物浓度呈反比.。TSA作用时间越长，药物浓度越高，aPAkt抑制剂KC_ι表达量越低。 结论 HDACI（TSA）通过抑制肿瘤细胞内组蛋白去乙酰化酶，使细胞内组蛋白过乙酰化，诱导肿瘤细胞的凋亡，同时降低极化调节蛋白aPKC_ι的表达，改变细胞极性，影响肿瘤的转移侵袭。
目的：探讨丙戊酸钠对胃癌SGC-7901细胞的放疗增敏作用。 方法：MTT法检测不同剂量及不同时间丙戊酸钠对SGC-7901细胞的抑制率、用克隆形成实验检测丙戊酸钠对SGC-7901细胞的放疗增敏比、流式细胞术检测细胞周期差异及细胞凋亡率。

其中MAPK信号通路中的一条经典途径——P38MAPK信号通路在肿瘤细胞侵袭和迁移发挥着重要的作用，活化的P38MAPK可以通过调节特定的转录因子的表达和生物活性，实现对肿瘤细胞生物学特性的影响。肿瘤细胞的上皮-间叶转变是指上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，也是肿瘤发生侵袭和转移的重要环节，其相关蛋白的表Talazoparib研究购买达水平变化与EMT的发生密切相关；EMT发生时，上皮源性肿瘤中的某些细胞在与周围间质相互作用时，丧失其上皮源性，表现为间质细胞特征，是肿瘤发生侵袭和转移的重要原因之一。此外基质金属蛋白酶9因参与基底膜与ECM主要成分IV型胶原的降解，而在肿瘤的侵袭和转移过程中也发挥着重要的作用。研究表明P38MAPK信号通路对肿瘤的复发和转移的确认细节影响可分别通过影响EMT相关蛋白的表达或者影响MMP9的活性而实现，但在肺癌中，三者之间的关系尚不明确。为此，本实验将通过抑制P38的活性，观察人肺癌细胞系（H1299、95C）的侵袭和迁移能力的改变，并重点研究其与EMT相关蛋白的表达水平的变化以及MMP9的活性水平和蛋白表达水平的差异，来探讨肺癌中P38参与调节肺癌的侵袭和转RAD001数据表移能力的可能的机制。 方法： 通过两种P38抑制剂：SB203580和SB239063抑制P38的活性水平。通过划痕实验和Transwell实验的方法，观察抑制P38的活性水平对两种人肺癌细胞H1299和95C的侵袭和迁移能力的影响；通过明胶酶谱实验来检测抑制P38活性水平对MMP9的活性的影响；并通过Western-blot的方法来观察抑制P38的活性水平对EMT相关蛋白和MMP9蛋白的表达水平的影响。

因此，本研究通过高通量的手段检测正常肝脏组织、慢性肝炎组织、肝硬化组织和肝癌组织中长链非编码RNA的表达，筛选在原发性肝癌发生和发展中可能发挥重要作用的长链非编码RNAs（包括MVIH和DANCR）进行深入研究，以期系统、深入地揭示长链非编码RNA在肝癌发生发展中所扮演的角色，为肝癌的诊断和治疗提供新的分子靶标。 第一部分正常、肝炎、肝硬化和肝癌肝脏组织中长链非编码RNSP600125 花费A的芯片检测和分析 研究目的：系统地考察病变肝脏组织中长链非编码RNAs的差异表达并筛选关键长链非编码RNAs作为深入研究的候选分子。研究方法：挑选行肝脏切除术后的正常、慢性肝炎、肝硬化、肝癌癌和癌旁等肝脏组织，使用芯片系统地检测长链非编码RNA和信使RNA的表达，利用生物信息学筛选与肝癌发生发展相关的长链非编码RNAs。结果：长链非编码RNA购买GSK1210151A和信使RNA在肝癌病人的肿瘤组织与癌旁组织、不同转移潜能的肿瘤组织中显著差异表达,其中长链非编码RNA-MVIH在肿瘤组织中显著上调表达；肝硬化和肝癌中长链非编码RNA和信使RNA的表达显著差异于正常肝脏组织和慢性肝炎组织；一组由长链非编码RNA和信使RNA构成的基因标签能够反映炎癌转化过程的不同阶段，其中长链非编码RNA-DANCR可能在肿瘤Selleck Rapamycin发生过程中发挥关键作用；此外，我们发现联合长链非编码RNA和信使RNA可以更好地区分不同转移潜能的肝癌组织。结论：长链非编码RNAs在肝癌发生、发展中差异表达，并有潜在的调控作用和临床意义；候选长链非编码RNA-MVIH和-DANCR可能在肝癌中发挥关键作用。 第二部分长链非编码RNA-MVIH诱导新生肿瘤血管生成从而促进肝癌转移 研究目的：本部分研究旨在探讨长链非编码RNA-MVIH在肝癌肿瘤新生血管形成中的功能与临床意义。

嘧啶是重要的六元氮杂环化合物,具有极强的生物学意义。在形成遗传物质DNA和RNA的5种碱基中,有3种是嘧啶类衍生物：胞嘧啶,胸腺嘧啶,尿嘧啶。嘧啶类化合物具有抗代谢、抗肿瘤、抗病毒等多种生理活性,是目前药物研究的热点。随着药物化学的发展和技术手段的日新月异,越来越多的靶向蛋白逐渐被INCB018424订单人们了解认识。针对靶向蛋白在信号通路的角色,设计合成具有特异性选择靶向蛋白的抑制剂,以达到增强选择性,减少对正常组织和细胞的损伤的目的。结合计算机药物辅助设计技术,引入嘧啶骨架,本论文设计合成了1个系列β-酮脂酰-酰基载体蛋白合成酶Ⅲ(E. coli FabH此网站)蛋白抑制剂和1个系列组蛋白去乙酰化酶(HDAC)蛋白抑制剂。通过元素分析、1H-NMR、13C-NMR、MS等手段确定了这些新化合物的结构。对所有的化合物进行了系统的活性筛选和构效关系研究,其中多数化合物具有良好的抗菌、抗癌活性。简述如下：以甲硝唑希夫碱类衍Pomalidomide数据表生物作为基本构架,引入嘧啶骨架合成系列化合物。采用1H-NMR、ESI-MS和元素分析对所有化合物进行表征鉴定。使用MTT法研究了所有化合物对4株细菌(E. coli ATCC 35218、 P. aeruginosa ATCC 13525、B. subtilis ATCC 6633、S. aureus ATCC 6538)的抑制活性。

方法运用MTT实验观察不同浓度的三种PARP-1抑制剂(AG014699、BSI-201、 AZD-2281)对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖的抑制作用,选择敏感的两种PARP-1印制剂AGO 14699和BSI-201,用流式细胞术(FCM)检测PARP-1抑制剂对HepG2细胞凋亡的影响；用Western Blot法检测PARP-1抑制剂对CasepaseSrc抑制剂3,Casepase8,Bax,Bcl-2蛋白的表达水平。用Transwell实验检测AG014699和BSI-201对人肝癌细胞株HepG2细胞迁移的影响。结果三种不同的PARP-1抑制剂(AG014699,BSI-201, AZD-2281)均具有抑制HepG2细胞增殖的作用,具有时间和浓度依赖性,但敏感性不同。AG014699,可能 BSI-201 (iniparib),AZD-2281 (olaparib)作用48h的IC50分别约为20μmo1/1,30μmol/l,400μmol/1。用流式细胞术检测敏感的两种PARP-1抑制剂AG014699和BSI-201诱导HepG2细胞凋亡的作用,用10 μmol/1,30μmol/1,50 μmol/1的 AG0不14699口20μmol/1,40μmol/1,60 μmol/1的BSI-201均能诱导HepG2细胞凋亡,48h时凋亡率明显高于对照组,二者有显著性差异(31% vs 0.01%,t=15.019, P AZD-2281),其中AG014699对HepG2细胞最敏感,BSI-201次之,AZD-2281不敏感。对于PARP-1抑制剂作为肝癌治疗的新靶点提供了初步实验依据,为肝癌的临床治疗提出了新的思路和方法。

混合胶束溶于水,形成壳-核形微粒,将活性药物紫杉醇包裹而保护在壳内,避免或减少活性药物在血液循环过程中的非特异释放或非目的性释放,减少毒副作用,同时达到靶区组织的治疗作用。理论上认为具备聚合物纳米微粒基于EPR效应的被动靶向效应,与叶酸介导的基于配体受体结合的主动靶向效应。本实验以人源性食管癌细胞等的体外细胞实验与小鼠体哪里内荷瘤实验来验证混合纳料胶束的抗肿瘤作用。主体实验部分是免疫力缺陷的裸鼠构建的皮下荷瘤模型,分组应用药物后记录瘤径变化,选择时间点取出肿瘤组织,测其重量与体积差异；生存时间分析；流式细胞仪、原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测不同剂型的紫杉醇药物对食管癌细胞的促凋亡作用；同时进行免疫组化检测而且与病理生物学检测食管癌细胞凋亡相关蛋白的表达差异以及形态学的比较。本次实验的结果显示,在紫杉醇药物当量为20mg／Kg时,叶酸-紫杉醇键合混合胶束的抑瘤活性优于紫杉醇纯药与键合紫杉醇胶束,认为增强的抑瘤效应归因于混合胶束共聚后外壳表面携带的质量比为1.4%的叶酸介导了对肿瘤组织的主动靶向与胞吞作DNA Synthesis抑制剂用。因此,同时键合叶酸与紫杉醇于嵌段共聚物的疏水基团,共聚化形成的紫杉醇聚合物与叶酸聚合物胶束是一项装载与制备靶向治疗药物的有效途径。 抗肿瘤活性药物紫杉醇稳定细胞内微管,抑制微管活动,促使有丝分裂中断并诱导细胞凋亡,已广泛应用于临床化疗。但是由于紫杉醇活性药物本身水溶性低,对机体存在非特异的全身性毒副作用,因而限制了其应用。为此,开发紫杉醇载体是有效解决这些缺点的策略之一。