论文第五部分报道了“一锅”合成5,9-环-1,11-环氧-孕甾-16-烯-3,20-二酮的一种新方法。该法以9-溴-11-羟基孕甾-1,4,16-三烯-3,20-二酮为原料,以绝对乙醇和雷尼镍为试剂,通过两次成环反应立体选择性的得到5,9-环-1,11-环氧-孕甾-16-烯-3,20-二酮,收率较高。产物分子量绝对构型也通过X射线衍射晶体分析进行确证。
研究背景 胰岛素瘤是最常见的胰腺内分泌肿瘤,占功能性胰腺内分泌肿瘤的70-80%,但由于其年发病率仅为4/百万,病例资源的稀缺导致临床医师对其临床特点及生物学行为认识不够透彻,并且也大大限制了对其发病机制的基础研究,国内外尚无关于其发Sirolimus体内病危险因素的大样本量流行病学调查,其发病、演进及转移机制目前仍不明了。近年研究发现哺乳动物雷帕霉素靶蛋白mTOR参与多种肿瘤的发生及进展,并且PRAS40在其中发挥重要的调节作用,mTOR/PRAS40/P70S6K信号转导通路是否参与胰岛素瘤的发病,PRAS40表达水平是否对m抑制剂TOR活性及胰岛素瘤增殖产生影响,目前仍不明了。 目的 (1)探索胰岛素瘤发病危险因素及高危人群； (2)了解mTOR/P70S6K通路在胰岛素瘤组织中活化、表达情况； (3)观察mTOR及PI3K/mTOR双重抑制剂对mTOR通路活性及对胰岛素瘤细胞增殖、胰岛素分泌功能及凋亡的影响； (4)探讨PRAS40表达水平对mTOR氵舌性及胰岛素瘤细胞增殖的影响。

方法:用终浓度为0.005,0.01,0.02,0.04μmol/L的米托蒽醌持续诱导MCF-7细胞30天,筛选耐药细胞,并用未做处理的MCF-7为对照组。采用CCK-8法以及流式细胞术检测不同药物浓度处理的乳腺癌细胞对米托蒽醌的耐受性,确定是否耐药诱导成功。蛋白免疫印迹杂交分别检测MCF-7/mit耐药细胞系中甲基化结合蛋白(Me也thyl-DNA-binding protein,MBD)MBD1、MBD2及MBD4的蛋白表达水平。利用毛细管电泳法检测MCF-7/mit全基因组甲基化水平。利用RNA干扰技术,构建PARP-1低表达细胞株,再通过BSP,检测对照组及PARP-1低表达细胞株的ABCG2、MBD4以及DNMT3b的基因启动Anticancer Compound Library supplier子区甲基化水平。结果:与对照组MCF-7细胞相比,随着米托蒽醌药物浓度的增加,经CCK-8法及流式细胞术检测发现细胞对米托蒽醌的耐受性逐渐增加。Western blot检测MCF-7/mit耐药细胞株中甲基化结合蛋白的表达,发现MBD1、MBD2、MBD4的表达均呈降低趋势,且MBD4的降低尤为明显(P
Saracatinib目的探讨多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)抑制剂AG014699联合吉西他滨或多西他赛对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法体外培养PC3细胞,实验分PARP抑制剂AG014699组、吉西他滨组、多西他赛组、PARP抑制剂联合吉西他滨组、PARP抑制剂联合多西他赛组。采用CCK-8法检测各组细胞活力;流式细胞术分析不同浓度的PARP抑制剂对PC3细胞凋亡及周期分布的影响。

本文共设计合成了40个目标化合物,并对所有化合物通过核磁共振氢谱、高分辨质谱等方法进行了结构确证。经查阅文献证实,所合成的目标化合物均为新化合物,未见文献报道。 第一系列合成了10个C-7位苯取代的化合物,体外抑酶实验显示部分化合物对Akt具有一定的抑制活性,化合物10c显示了良好的抑酶活性,与先导化合物相当,比阳临床试验性对照GSK690693略低。分析此类化合物的结构发现：N-1位甲基引入有利于抑酶活性的提高；C-2位甲酯,C-4位2-氨基乙氧基对酶活和细胞活性都有促进作用；C-7位引入大体积的基团对活性影响不好。据此,我们在化合物10c的基础上,在2-氨基乙氧基上引入疏水性基团,C-7位苯基替换为小体确认细节积的甲氧基和卤素,得到了23个第二系列的化合物。体外抑酶实验表明本系列化合物相比于第一系列化合物,活性明显提高。化合物29b、29f、33ac、33bc和33bf对Akt1的抑制活性较高,在10nM的抑制率分别为72.5%、70.3%、73.0%、73.5%和76.9%,超过阳性对照药GS可能K690693。通过对接研究发现,第二系列化合物与ATP结合位点的作用优于第一系列的化合物,引入的C-7小体积基团能够进入背部口袋,2-氨基乙氧基上引入是疏水性基团能够与G-loop结合产生疏水性作用。第三系列化合物是在C-7位甲氧基取代化合物的基础上,利用生物电子等排的原理将甲酯等排为甲基噁二唑环得到,化合物37b表现出最高的Aktl抑制活性,抑制率为78.6%。

综上所述,本课题主要针对c-Met设计了118个信化合物,合成出了36个新化合物,未见文献报道,此外还合成了17个关键中间体。所有目标化合物合成中都用到了Suzuki耦合反应,该反应在在DMF/H2O的混合溶剂中、Pd (PPh3)4催化下进行获得较高的收率,得到的的目标化合物以吲哚唑selleck化学药品类、2,3,4,5-四氢-1H-吡啶并[4,3-b]吲哚类、螺[吲哚啉-3,4’-哌啶]-2-酮类化合物有较好的抗肿瘤活性,WXY030、WXY022和WXY023对c-Met生化半抑制浓度(ICso)达到了10nM,显示强的抗肿瘤活性,对分子水平抑制作用强的许多化合物进行细胞研究显示部分化合物对MKN45细胞中c-Met的抑制作用达到了10μM。分子对接研究证实和解释了这些化合物的活性。为开发具有临床应用价值的c-Met酪氨酸激酶抑制剂奠定基础。
背景与目的 结肠癌转移相关基因1(metastasis-associselleckated in colon cancer1, MACC1)是新近发现的与结肠癌转移相关的基因,其在多种肿瘤组织中存在异常高表达。MACC1是HGF/c-Met信号通路的关键调控点。目前,尚无MACC1与宫颈癌相关的报道,MACC1是否会参与宫颈癌的发生发展、其对宫颈癌发生发展的分子机制如何、其对宫颈癌的临床意义何在,这些问题一直困扰着我们。

EGFR及其配体在肿瘤恶性行为中发挥重要角色,涉及增殖、分化、抗凋亡、血管新生和转移等多个方面。在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)患者中,超过90%存在EGFR的表达。作为独立的预后因素,EGFR高表达与放射敏感性降低及复发风险增加相关,其结果是降低HNSCC患者的总体生存
骨质疏松症是一种多因素导致的什么全身代谢性骨骼疾病,骨转换失衡是其重要的病理机制。骨质疏松症的治疗靶点主要集中在抑制破骨细胞的活性及促进成骨细胞的形成方面。随着成骨及破骨细胞对骨作用的分子间信号通路等骨生物学研究的深入,一些新的治疗靶点被陆续发现。目前,较有前途的新的治疗药物主要有抗核因子κB受体活化因子配体单克隆抗体狄诺塞麦,组织蛋白酶K抑制剂奥达卡替和ONO-5334,Src激酶Temozolomide分子量抑制剂沙拉替尼等。
骨质疏松(osteoporosis)是一种最为常见的代谢性骨病,主要表现为骨量减少、骨组织微结构破坏从而导致骨痛、骨脆性及骨折危险性增加。目前临床常用抗骨质疏松药物可分为骨吸收抑制剂、骨形成刺激剂及骨矿化药物。选择性雌激素受体调节剂(SERMs)作为一种新型骨吸收抑制剂,于骨骼系统表现为雌激素激动剂作用,于乳腺等组织表现为雌激素拮selleck合成抗剂作用,从而不增加致癌风险。骨保护素(OPG)及抗RANKL单克隆抗体可与核因子KB受体活化因子(RANK)竞争结合其配体(RANKL),从而抑制破骨细胞骨重吸收作用。C-src激酶抑制剂可阻断破骨细胞的细胞内信号转导通路从而不能形成完整的细胞骨架,氯离子通道阻滞剂可破坏破骨细胞骨吸收酸性微环境,αVβ3整合素抗体及其受体拮抗剂可减弱破骨细胞与骨组织粘附,组织蛋白酶K抑制剂可减少骨胶原裂解,从而均有待于成为新一代骨吸收抑制剂。

应用等级相关检验来检验miR-34b表达水平与phospho-Met, p53(phospho S392)以及Mdm2相关关系。 研究结果：miR-34b在非小细胞肺癌中低表达,并与淋巴结转移负相关(P=0.031). miR-34b通过诱导凋亡抑制肿瘤增殖。非小细胞肺癌中miR-34b表达与c-Met负相关(P=0.012)。 结论：miR-34b影响肿瘤细胞的凋亡、增殖、转移,在selleck化学药品液面控制肿瘤发展过程中发挥抑制肿瘤的作用；HGF-Met信号通路中p53磷酸化并增强转录活性,上调miR-34b,反馈抑制c-Met。由于p53信号通路参与细胞周期抑制与细胞凋亡,并于其中发挥重要作用,因此miR-34基因可能受到抑癌基因p53的调节,而p53可以通过miR34调节一系列的下游蛋白。另外,miR-34又可以反向作用于p53的mRNA,从而避免p53的时间连续激活。
垂体腺瘤是神经外科常见的肿瘤，其发病率仅次于胶质瘤和脑膜瘤，约占所有颅内肿瘤的25%。虽然这些肿瘤大多是良性的，但是会通过占位效应和/或垂体激素分泌紊乱而引起特征性病变。目前一个比较好的分类方法是依据垂体腺瘤的形态和功能相结合而进行分类，可以将垂体腺瘤分为：泌乳素（PRL）细胞腺瘤，生长激素（GH）细胞腺瘤，促肾上腺皮质激素（ACTH）细胞腺瘤也许，促甲状腺素（TSH）细胞腺瘤，促性腺激素腺瘤，多分泌功能细胞腺瘤，无内分泌功能细胞腺瘤和恶性垂体腺瘤。其中，PRL垂体腺瘤是最常见的类型，约占垂体腺瘤的40%~60%。PRL垂体腺瘤存在着明显的两性差异，包括发病年龄和临床症状等，其发病多见于女性并倾向于年轻女性，往往表现激素的失调，而男性患者发病往往较晚，并且多为大腺瘤，往往会产生占位效应和垂体功能减退症状，继而引发腺垂体的破坏。因此对它的研究，尤其不同性别组之间的研究是很必要的。

中浓度(60μM)TCA作用于K562细胞24 h后,G2/M期细胞比例明显增加,持续作用48 h后,G2/M期细胞比例进一步增加,作用72 h时,K562细胞G2/M期比例下降,出现明显凋亡。TCA诱导HL60细胞分化伴原癌基因c-myc表达下降,细胞周期相关蛋白p27表达增强。TCA诱导K562细胞分化伴c-myc基因表达下调,Crkl蛋白磷酸化水通常平下降。TCA诱导HL60细胞分化还伴p16蛋白表达增加,向核内移位,而Cdc6蛋白表达下降,向核外迁移。TCA可协同增强ARTA对HL60细胞的诱导分化效应。 结论: TCA(≤60μM)可诱导髓细胞白血病细胞分化,但不同种类的细胞对TCA的反应有差异性,而且同种白血病细胞对不同浓度的TCA的反应不同。TCA诱导HL60白血寻找更多病细胞分化与c-myc蛋白水平下降和p27蛋白水平上调有关,p16基因和Cdc6基因参与TCA诱导的HL60细胞分化过程。TCA可增强ATRA对HL60细胞的诱导分化效应。TCA诱导K562细胞的分化与c-myc和Crkl蛋白磷酸化水平下降有关。 第四部分反式桂皮醛对急性髓细胞白血病细胞粘附和迁移的影响 目的:本部分旨在研究反Raf pathway式桂皮醛(trans-cinnamaldehyde,TCA)对急性髓细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞粘附和迁移的影响。 方法:TCA处理AML细胞株HL60细胞,流式检测细胞表面CXCR4的表达。Transwell法检测不同浓度TCA对重组基质细胞衍生因子-1α(stromal cell derived factor-1α,SDF-1α)诱导的HL60迁移和浸润的影响。

研究结果表明，antiEGFR/MEL可以抑制S180实体肿瘤生长、延长动物模型生存期、延长动物模型肿瘤倍增时间和肿瘤生长延迟时间。以上结果说明，antiEGFR/MEL具有应用于骨肉瘤生物治疗研究的潜质。
目的：异常的血管生成,包括内皮细胞激活、降解基底膜、内皮细胞的定向运动和增殖、新生微血管、内皮细胞新的基底膜合成、血管腔产生、芽式生长并形成血管襟等一系Nintedanib订单列步骤,是肿瘤细胞增殖,侵袭和转移的先决条件。Abl和Akt (proteinkinase B, PKB)蛋白激酶是肿瘤细胞和血管内皮细胞内两个重要的信号通路节点,他们可以通过磷酸化下游底物来调节肿瘤细胞和内皮细胞内许多重要的生理过程,包括细胞存活、增殖、迁移和血管生成等。 蛋白激酶抑制剂根据作用于激酶结合位点的不同分为三种：作用于A通常TP结合位点的蛋白激酶抑制剂,作用于调节区的蛋白激酶抑制剂和蛋白激酶底物竞争性变构抑制剂。近几年,多种靶向于蛋白激酶的药物如Sunitinib、Sorafenib、 Pazopanib等被成功推向了市场用于各种肿瘤的治疗。尽管这些肿瘤血管生成抑制剂有着很大的优势,但是实际应用仍存在部分肿瘤对血管的新生依赖性不强、突变及肿瘤信号传导的代Sorafenib临床试验偿性导致的耐药、不良反应和毒性等问题。因此进一步开发选择性更强、活性更高且毒性更小的小分子蛋白激酶抑制剂仍然非常必要。随着对Bcr-Ab1和Akt相关信号通路研究的不断深入,Bcr-Abl和／或Akt抑制剂的研究已经成为抗肿瘤药物研究的热点。 方法：本研究首先在计算机虚拟筛选的过程中发现了具有明显抗血管生成作用的化合物Hit6a。后期的酶谱筛选工作表明,6a可以选择性的抑制Abl和Akt1两个激酶,靶点非常明确。

实验首先扩增并纯化了重组人ndrg2腺病毒(pAd-CMV/V5-DEST-ndrg2S)，western blot结果证明重组人ndrg2腺病毒感染的HEK293细胞能够正确表达NDRG2蛋白。实验检测其TCID50/mL为：2.5×10~(10)IU/ml。 对三株胶质瘤细胞进行培养，用western blot检测其NDRG2表达；MTT法检selleck产品测重组人ndrg2腺病毒和今又生对这三株胶质瘤细胞的增殖抑制作用。结果表明：三株胶质瘤细胞ndrg2均为低表达；重组人ndrg2腺病毒和今又生两种药物对三株胶质瘤细胞均表现出明显的增殖抑制作用，随着病毒浓度的增大，其对细胞生长抑制作用增强。其中重组人ndrg2腺病毒和今又生对胶质瘤细胞A172和SHG-44的增殖抑制作用获悉更多基本相同，在最大浓度1.68×10~(11)v.p/ml时这二者对A172的抑制率接近100%；在胶质瘤细胞SHG-44中，在最大浓度1.68×10~(11)v.p/ml下，重组人ndrg2腺病毒对其抑制率为73%，而今又生的抑制率为50%；对胶质瘤细胞U251的增殖抑制作用中，重组人ndrg2腺病毒抑制作用优于今又生，Autophagy Compound Library具有统计学意义（p<0.05）。本实验为下一步的体内药效学实验提供了理论基础。
目的：观察细胞周期蛋白D1（CyclinD1）在非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer，NSCLC）中的表达，并探讨其与非小细胞肺癌临床病理学特征、P16蛋白表达情况的相关性及意义。 方法：收集大连医科大学附属第一医院2012-2014年存档蜡块，其中非小细胞肺癌143例，肺炎性假瘤37例。

这主要是由于乳腺癌本身具有高度异质性，发病因子、疾病演进、治疗反应和器官转移倾向等互异。要想彻底地战胜乳腺癌，需要更深入地研究乳腺癌发生、发展相关的信号通路，寻找新的个体化治疗靶点。鉴于PI3K/AKT/mTOR通路的上游成员例如ER、PR和HER2在乳腺癌的重要地位，同为上游成员的胰岛素样生长因子1受体（insulin-like g通常rowth factor1receptor，IGF-1R）引起研究者们的极大兴趣。IGF-1R是一种异四倍体的细胞质膜糖蛋白，为一种跨膜的酪氨酸蛋白受体。在结合胰岛素样生长因子配体后，通过自身磷酸化，激活PI3K以及MAPK信号通路，调控细胞的增殖、分化和衰老。该通路在乳腺癌中的高频率失调,并证实其介导的信号LY2109761溶解度在乳腺癌的生长、演变、侵袭以及肿瘤血管生成、转移中均扮演着重要的角色。作为肿瘤靶向治疗最有前景的靶点之一，针对IGF-1R的靶向治疗药物也逐渐问世。早期的试验结果非常令人鼓舞，遗憾的是随后进行的试验中有很多结果是失败的，这说明我们对信号通路的认识并不充分,使得我们有必要更深层次地探讨其调控机制，并进一步寻找能BYL719够预测抗IGF-1R治疗效果的生物标志物，进而选择潜在获益的正确的目标人群。新近研究发现，曾经被认为是基因转录“副产品”或“暗物质”的长链非编码RNA（long non-codingRNA,LncRNA）能够通过多种作用方式调控肿瘤细胞的基因表达，从而广泛参与肿瘤的发生及转移。LncRNA是指一类长度超过200个核苷酸的RNA分子的总称，已经成为当今分子生物学最热门的前沿研究领域之一。