Declining in incidence in western countries, it continues to be a significant public health problem in the

far east. Targeted treatments are novel therapies 所以 introduced in the clinical therapeutic armamentarium of oncology in the last 10-15 years. They represent a rational way of treating various cancers based on their molecular lesions. Although no such agent has been approved so far for the treatment of esophageal squamous cell carcinomas (ESCC), several are in clinical trials and several others have displayed pre-clinical activity that would justify the efforts and risks of pursuing their clinical development in this disease. This paper discusses some of these targeted agents in more advanced development in metastatic ESCC, as well as some promising drugs with NLG919 pre-clinical or initial clinical data in the disease.
目的:探讨双特异性酪氨酸磷酸化调节激酶2(dual-specificity

tyrosine phosphorylation-regulated kinase2,DYRK2)在胰腺癌中的表达及其临床意义.方法:应用实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组织化学技术检测40例胰腺癌及其癌旁正常组织标本中DYRK2mRNA和蛋白的表达量,并结合免疫组织化学结果及胰腺癌患者的临床病理资料进行统计学分析.结果:实时荧光定量PCR检测显示,DYRK2m R N A在胰腺癌及其癌旁组织中均有表达,但后者的表达水平明显高于前者(P<0.05).结论:DYRK2在胰腺癌组织中表达下调,可能与胰腺癌的发生发展和淋巴结转移等恶性生物学行为相关.
vismodegib是一种具有选择性Hedgehog信号通路抑制活性的新型药物。临床研究证实vis-modegib对基底细胞癌(BCC)有效,美国食品药品管理局(FDA)2012年1月批准了vismodegib用于治疗局部进展期和转移性的BCC。文中就BCC的Hedgehog信号通路机制、vismodegib药理作用、药动学以及临床研究做一综述。
小细胞肺癌(small selleck公司 cell lung cancer,SCLC)大约占到原发肺癌的15%,药物治疗近30年没有大的变化。尽管几十年来有大量的生物学和临床研究,但是目前已经确立的小细胞肺癌的治疗方法是存在着公认的不足的。虽然一些已完成的随机研究进一步确定了有效的治疗策略,如最佳的治疗药物或治疗时间,最合适的剂量和放射治疗的时机,以及为临床实践提供更可靠的询证医学证据,不幸的是这些试验的结论多数是相反的,所以需要对这些试验进行Meta分析以求对个别情况给出清晰的临床治疗策略。本文对目前已有的主要Meta分析结果进行综述。
髓母细胞瘤(medulloblastoma,MB)是一种高度恶性的中枢神经系统肿瘤,好发于儿童,预后极差。MB的标准的治疗方案包括手术切除和/或联合放化疗,患者生存率有所提高,但放化疗后遗症大大降低了存活者的生活质量。近年来,分子生物学研究技术快速发展,基于基因组模式的分型方式对MB有了全新的认识视角。目前普遍认为MB可分为4个独立的分子类型,即WNT型(WNT

subtype)、SHH型(SHH subtype)、3型(Group 3)和4型(Group 4)。各个亚型之间在临床特征、病理分型、分子生物学、预后等方面均具有显著区别。深化MB分子生物学研究,探索各亚型特有的发病机制,优化危险分层标准及个体化治疗方案,以期找到新的高效、低毒副作用的药物,提高患者生存率、减低治疗后遗症将成为MB研究的新焦点。
Epithelial ovarian carcinoma (EOC) is the most common form of ovarian malignancies and the most lethal gynecologic malignancy in the United States. To date, in spite of treatment to it with the extensive surgical debulking and chemotherapy, the prognosis of EOC remains dismal.

674,P=0.005)。(3)通过AliBaba2.1转录因子预测软件预测EGF G61A位点前后序列的转录结合因子结合情况发现,G等位提供了更多的转录因子SP1的顺式作用原件。 结论: (1)EGF外显子区域的单核苷酸多态性位点:外显子1中的S16R、外显子8中的R431K、外显子14中的I708M、外显子15中的D784V,同HCC的发生之间不存在遗传学关联。 (2)EGF 5’调控区的G61A同肝癌的发生显著相关。A等位可能通过等位特异的方式,降低EGF基因的转录使表皮生长因子的表达量下降,使肝癌的发生风险降低。我们的结果提示EGF基因的遗传多态性在肝癌的发生中发挥重要的作用。
目的 恶性肿瘤发生远处转移是肿瘤患者病程进展、致残和致死的主要原因。侵袭性是指肿瘤细胞侵入邻近组织的能力,该过程是恶性肿瘤的主要特征,亦是其发生转移的第一步。与肿瘤细胞侵袭性和发生转移相关的机制极为复杂,目前人们已经对该过程中的一些蛋白水解酶和原癌基因有了初步认识,如与细胞微环境中细胞外基质降解相关的基质金属蛋白酶-2以及与肿瘤侵袭性生长相关的原癌基因c-met。另一方面,开发具有抗癌作用的天然小分子无机化合物是目前抗肿瘤药物研发的一个热点。本文旨于研究轻稀土化合物氯化镧对肿瘤细胞增殖、侵袭和转移的作用,分别以与肿瘤侵袭和转移相关的蛋白水解酶和原癌基因为靶点,进一步阐明稀土对肿瘤细胞作用的作用机制,扩大稀土化合物的应用领域,为临床抗肿瘤药物的研发提供新方向。

PLX4032 方法 (1)采用MTT法观察轻稀土化合物氯化镧对乳腺癌细胞MCF-7及人纤维肉瘤细胞HT-1080的毒性作用。 (2)采用侵袭性试验探讨氯化镧对人纤维肉瘤细胞HT-1080侵袭性的影响。 (3)通过明胶酶谱法和Western Blot测定低剂量氯化镧(≤20μmol/L)对人纤维肉瘤细胞HT-1080细胞基质金属蛋白酶-2表达和活性的影响。 (4)应用RT-PCR法,分别调查低剂量氯化镧对肿瘤细胞HT-1080细胞基质金属蛋白酶-2转录的影响(≤20μmol/L)以及对乳腺癌细胞MCF-7原癌基因c-met转录的影响(≤100μmol/L)。 (5)构建Luciferase基因报告系统,应用PCR技术合成MMP-2启动子区域的突变位点,探讨轻稀土化合物对人纤维肉瘤细胞株HT-1080 MMP-2的作用机制。 结果 (1)细胞毒性试验表明,轻稀土化合物氯化镧浓度低于50μmol/L时,氯化镧无论对MCF-7细胞株还是HT-1080细胞株的生长均无抑制作用。随着浓度增加,氯化镧对肿瘤细胞的增殖出现抑制作用,且抑制作用随浓度的增加而增强;但是当氯化镧浓度过大(＞400μmol/L)时,氯化镧对肿瘤细胞增殖的抑制作用不再出现浓度依赖性。此外,不同细胞对氯化镧的敏感性不同,人纤维肉瘤细胞株HT-1080对氯化镧的敏感性更高。 购买Rapamycin (2)通过侵袭性试验表明,在对肿瘤细胞生长无明显作用的浓度范围内(＜50μmol/L),氯化镧对肿瘤细胞的侵袭性有抑制作用,且抑制作用随氯化镧浓度的增加而增强。 (3)通过明胶酶谱法和Western Blot试验证实,对肿瘤生长无抑制作用的浓度范围(＜50μmol/L)的氯化镧可抑制pro-MMP-2的活性及含量,但是其对活化形式的MMP-2无抑制作用。 (4)应用RT-PCR法,进一步观察了低浓度氯化镧对原癌基因c-met和蛋白水解酶MMP-2基因转录的作用。低浓度氯化镧可以下调c-met以及MMP-2的基因转录,并且抑制作用随氯化镧浓度的增加而增强。

(5)通过Luciferase报告系统以及启动子突变的方法测定MMP-2的启动子活性,证实氯化镧通过作用于人纤维肉瘤细胞HT-1080 MMP-2启动子区的CREB结合位点,阻断了PKA/CREB通路而抑制该细胞MMP-2mRNA的转录并降低MMP-2的分泌,从而降低了肿瘤细胞的侵袭性。 结论 不同浓度的轻稀土化合物氯化镧对肿瘤细胞的作用不同,高浓度氯化镧(＞100μmol/L)可抑制肿瘤细胞的增殖,低浓度的氯化镧(＜50μmol/L)对肿瘤细胞的侵袭性有一定抑制的作用。同一浓度的氯化镧对不同肿瘤细胞的增殖作用不同。低浓度的氯化镧通过抑制与肿瘤侵袭性相关的蛋白水解酶(MMP-2)的转录和表达以及抑制与“侵袭性”生长相关的原癌基因c-met表达,降低了肿瘤的侵袭性。这为未来临床个体化治疗提供了初步依据,亦为扩大稀土资源在医药领域的应用提供了新方向。
目的:检测mTOR/P70S6K信号通路中mTOR和P70S6K在肝细胞肝癌组织(HCC)中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的作用及临床意义。

方法:选取20例HCC组织及相应癌旁组织,10例正常肝组织。采用两步法提取总RNA, RT-PCR法检测mTOR及P70S6K mRNA在HCC组织和相应的癌旁组织及正常肝组织中的表达情况,并分析mTOR及P70S6K mRNA的表达与相关临床病理参数的关系。 结果: 1)mTOR mRNA在HCC组织中的表达水平(0.594±0.218)明显高于癌旁组织(0.437±0.156)及正常肝组织(0.383±0.081)(P
目的: 舌部鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是颌面外科较常见的肿瘤,其发病率,致死率位于口腔癌的首位,舌癌的恶性程度高,浸润性强并易早期发生淋巴结转移,预后较差,术后常继发畸形,对患者的生存质量造成极大的影响。自分泌运动因子受体(autocrine motility factor receptor,AMFR)能刺激下游区域的信号传导通路导致细胞运动的上调,致其随机和定向运动。肝细胞生长因子(heptaocyte 获悉更多 growth factor,HGF),其受体是由原癌基因C-Met编码产生的跨膜蛋白,与人类许多肿瘤的生长,侵袭及转移密切相关。本实验通过免疫组化SP法检测正常舌体组织及舌癌中AMFR、C-Met的表达,并分析其表达与临床病理特征之间的关系。 材料与方法: 1.选取正常舌体组织(normal tongue tissue ,NOM )10例、TSCC 80例,收集性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、淋巴结转移及临床分期等资料。 2.采用免疫组化SP法检测10例NOM、及80例TSCC石蜡切片中AMFR和C-Met的表达。正常舌体组织作对照。 3.统计分析NOM及TSCC中AMFR和C-Met表达的差异;分析AMFR和C-Met蛋白的表达与TSCC各临床病理参数之间的关系,探讨AMFR和C-Met表达水平之间的关系。 结果: 1.在TSCC组织中,AMFR阳性表达在癌细胞的细胞质和胞膜,有个别的病例偶见核阳性,阳性率为:76.25%,其中阳性(+):32例(40%);强阳性(++):29例(36.25%),在NOM中不表达。在TSCC中AMFR高表达与舌癌的TNM有关(P0.05)。 2.

A high frequency of hotspot mutations known as E542K,E545K and H1047R in the PIK3CA gene…
BACKG ROUD:ZSTK474[2-(2-difluoromethylbenzimidazol-1-yl)-4,6-dimorpholino-1,3,5-triazine]is a novel PI3K inhibitor which has potent anti-tumor effects.In addition,emerging evidence suggests ZSTK474may have anti-inflammatory and immunomodulatory properties

as well.Although its molecular mechanisms…
目的:利用荧光素酶报告基因系统,确定人p55PIK基因启动子全长序列和启动子核心序列;利用生物信息学技术,分析并预测人p55PIK基因启动子核心序列中可能影响转录活性的顺式作用元件;利用定点突变技术,观察上述DNA位点对p55PIK的转录活性的影响,明确哪些位点及相应转录因子在p55PIK的转录调节中起重要作用。 方法:以从正常人基因组DNA作为模板,用聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)法扩增基因组DNA人p55PIK基因5’端非编码区DNA不同长度片段,分别克隆到pGL3-Basic荧光素酶报告基因载体得到(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45) TAM Receptor抑制剂 -p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK;在HepG2、Hela细胞中,利用荧光素酶报告基因法检测各片段DNA序列的报告基因活性,确定人p55PIK基因启动子活性最强的全长序列和活性变化最大的启动子核心序列;利用生物信息学方法,分析这一启动子核心序列并预测可能与之结合的转录因子和相应的顺式作用元件;利用定点突变技术结合荧光素酶报告基因检测技术,明确哪些位点及相应转录因子对p55PIK转录活性其重要作用。

SKI-606浓度 结果:构建得到p55PIK基因上游调控区不同长度片段的荧光素酶报告基因载体(-651/+45)-p55PIK、(-839/+45)-p55PIK、(-1064/+45) -p55PIK、(-1243/+45)-p55PIK和(-1633/+45)-p55PIK,酶切及测序鉴定分子量及序列正确;观察各质粒的相对荧光素酶活性,HepG2中(-1243/+45)-p55PIK的相对荧光素酶活性分别为4.90±0.21, 可能 p0.05) 结论:人p55PIK基因的启动子全长片段位于(-1243/+45),其核心片段位于(-1243/-840);其中若干DNA位点可能与MZF1、YY1、RUNX1、ADR1、IRF1、Delta E、p300等转录因子结合并调节p55PIK基因的转录;位于p55PIK基因的启动子(-900/-896)的“TGGGGA”位点可能与MZF1蛋白结合显著影响p55PIK基因启动子的转录水平。 目的:阐明MZF1在p55PIK转录调控中的作用及其机制,并观察该作用对肿瘤细胞增殖的影响。 方法:我们利用染色质免疫共沉淀法验证了MZF1蛋白与p55PIK启动子(-900/-896)位点的TGGGGA序列DNA之间的结合,阐明MZF1对p55PIK的转录调控作用的具体机制。我们分别在肿瘤细胞系中高表达、低表达了MZF1蛋白。用荧光素酶报告基因系统、荧光定量PCR法和Western

Blot免疫印迹法分别检测了p55PIK基因的转录水平、mRNA水平和蛋白表达水平的变化,阐明p55PIK是否受MZF1的转录调控;利用BrdU掺入法检测了细胞DNA合成能力,利用Ki67法检测了细胞增殖相关抗原的表达,p55PIK接受MZF1蛋白的转录调控对肿瘤细胞增殖的影响。在该作用的临床意义方面,我们利用荧光定量PCR法,检测了10例结直肠癌患者的肿瘤标本和正常组织标本中的MZF1和p55PIK的mRNA水平,分析了二者的表达的变化及相关性,阐明p55PIK表达与MZF1的表达的相关性,以及p55PIK在结直肠肿瘤发生发展中的作用及意义。 结果: MZF1 Antibody组和Input组均有明显的条带,而阴性对照IgG组则无明显条带。GFP-MZF1质粒组的p55PIK全长相对荧光素酶活性显著高于GFP空质粒组(P<0.01),MZF1-SiRNA组的p55PIK全长相对荧光素酶活性较SiRNA组显著降低(P<0.01),MZF1-SiRNA组的p55PIK的mRNA水平显著低于(SW480中P<0.01,LOVO中P<0.05)。GFP-MZF1质粒组DNA合成能力显著高于GFP空质粒组(P<0.01),MZF1-SiRNA组组DNA合成能力显著低于SiRNA组(SW480中P<0.01,LOVO中P<0.01),MZF1-SiRNA组Ki67荧光强度显著低于SiRNA组(P<0.

目的 肺成纤维细胞是放射性肺纤维化的效应细胞,基于前期的实验研究,本研究拟采用血清药理学的方法,通过观察养阴清肺方和激素对钴60射线照射后的人胚肺成纤维细胞的不同影响,证实养阴清肺方是否能抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,改变细胞生长周期,减少细胞因子TGF-β1及α-肌动蛋白的表达。阐明养阴清肺方是否通过影响细胞生长、细胞因子的分泌及蛋白的表达来减轻肺纤维化的发展,探讨养阴清肺方对放射性肺纤维化的作用,从而证实本方临床治疗放射性肺纤维化的有效性,为药物的进一步开发应用提供实验依据,推动中医药在治疗放射性肺纤维化中的应用。 http://www.selleckchem.cn/products/Y-27632.html 2.方法 本实验分为4组：中药组、激素组、中药加激素组、空白对照组,采用血清药理学方法,分别给4组Wistar大鼠灌胃,然后采集血清,分装、保存。采用钴60射线照射人胚肺成纤维细胞,然后用不同含药血清对照射后的肺成纤维细胞进行干预。 先采用不同照射剂量(分别为0Gy、3Gy、5Gy、8Gy)钴60射线照射人胚肺成纤维细胞,然后用MTT法检测不同照射剂量对细胞增殖的影响,选用对细胞增殖作用最强的照射剂量作为以下实验的照射量。 采用前一实验所得出的最佳照射剂量照射肺成纤维细胞,然后分别加入不同组别的含药血清培养,分别于24、48、72小时后检测每组细胞的增殖情况,评估不同药物对肺成纤维细胞的抑制率。 采用最佳照射剂量照射后,加不同含药血清培养,采用流式细胞技术分析肺成纤维细胞的凋亡及周期情况,分析细胞生长周期受不同药物干预后的变化情况以及不同药物对细胞凋亡的影响。 TGF-β1在肺纤维化的发生、发展过程中起着非常重要的作用,将细胞通过照射和含药血清培养后,采用ELISA试剂盒检测培养24、48、72小时后不同组细胞分泌的细胞因子TGF-β1的含量；分析不同药物对肺成纤维细胞自身分泌TGF-β1的影响。

α-肌动蛋白是肌成纤维细胞的特异性表达,而肌成纤维细胞在肺纤维化的发生发展过程中也起着很重要的作用。将细胞经过上述实验中的方法处理后,高内涵筛选方法观察α-肌动蛋白的变化情况,以分析不同药物对α-肌动蛋白表达的影响。 3.结果 经不同剂量(OGy、3Gy、5Gy、8Gy)射线照射后的各组的OD值与阴性对照组相比均有显著性差异(P<0.05),各实验组之间也有差异(P<0.05),且中药组、激素组、中药加激素组之间分别都有差异(P<0.05),且中药组、激素组、中药加激素组之间也有差异(P<0.05),中药组的作用最突出。在48小时这一时相,中药、激素、中药加激素组与空白组均有差异(P0.05),但这一时间点细胞的凋亡率均明显小于24小时的细胞凋亡率。在72小时这一时间点,中药、激素、中药加激素组各组与空白组均有差异(P<0.05);中药、激素、中药加激素组之间亦有差异(P0.05),其余各组之间均有差异(P0.05),其余各组之间均有差异(P0.05),中药组与激素组之间无差异(P>0.05),其余各组之间均有差异(P<0.05)；中药、激素两组分别与中药加激素组都有显著差异(P0.05)。

也许 4.结论 肺成纤维细胞经射线照射后,增殖明显加快,且在0-8Gy的照射范围内,这一趋势与照射剂量成正相关,随着照射剂量的加大,细胞的增殖和存活率也增加。 中药加激素抑制细胞增殖的能力最明显,激素对细胞的抑制能力强于中药。在48小时内,药物对细胞的抑制率呈上升趋势；在48小时达到高峰；之后呈下降趋势。 各药物组均具有明显的促进照射后肺成纤维细胞凋亡的能力。在24小时时相,中药促进细胞凋亡的能力明显强于其它两组(激素组和中药加激素组),且这一时相各组药物促进细胞凋亡的能力最突出。

各组药物可能均是通过阻滞GO/G1期和G2/M期,减少S期而改变细胞周期,从而减少细胞的增殖并促进细胞的凋亡。 24小时内,中药组抑制细胞分泌TGF-β1的能力很微弱,激素联合中药组的作用较强。在48小时时相,中药抑制肺成纤维细胞分泌TGF-β1的作用最强。在72小时时相,激素联合中药组抑制其分泌TGF-β1的作用减弱,中药和激素均能抑制细胞分泌TGF-β。 各药物组均能减少经钴60照射后的肺成纤维细胞表达α-肌动蛋白,中药联合激素组抑制α-肌动蛋白表达的作用最强,中药和激素二者没有差异。
植物的耐逆性是信号网络中多个基因相互作用、共同调控的结果,为了更好地理解植物耐逆性相关机制,有必要研究植物基因在非生物胁迫情况下的表达模式。 利用基因芯片,本实验室建立了盐和非盐胁迫下的大豆基因表达图谱,比较了它们的表达差异,筛选出与耐盐胁迫有关的多个候选基因。本文从候选基因中克隆了一个锌指蛋白转录因子基因和一个蛋白激酶基因,对它们在耐逆性中的作用进行了研究。 主要研究内容和结果包括： 通过比较大豆盐及非盐胁迫下的基因表达差异,发现17个锌指蛋白家族基因和26个蛋白激酶家族基因在盐胁迫下上调表达。在上述上调表达的2类基因中筛选并克隆了1个锌指蛋白基因GmZnFl和1个蛋白激酶基因GmPK6,并进行了功能研究。 1GmZnF1的克隆与初步功能分析 没有 1.1GmZnF1基因的芯片结果验证 半定量RT-PCR分析表明,GmZnFl基因在盐胁迫下,表达量随着胁迫时间的延长,表达量逐渐增加。 1.2GmZnFl蛋白结构、性质及系统进化分析 GmZnF1基因编码的蛋白是典型的C2H2-ZnF蛋白,具有一个跨膜结构域,一个复杂性较低的区域和一个DPBB-1样结构域。GmZnF1蛋白的疏水性较强,推测可能含有跨膜结构域。GmZnFl和油菜RING型E3泛素连接酶的同源性较高(99.0%),与拟南芥中玉山筷子芥锌指家族蛋白有同源性(48.0%),并且与蒺藜苜蓿E3泛素蛋白连接酶有同源性(38.0%)。 1.3GmZnF1转录激活活性分析 利用酵母转录激活体系证明该蛋白具有转录激活活性,从而佐证了该基因是转录因子。 1.4GmZnFI基因表达模式分析 qPCR结果表明GmZnFI在大豆的根、茎和花中表达量最高,在叶片和种子中表达量较低,且其表达受ABA、盐胁迫、干旱和冷胁迫的明显诱导,在盐和旱诱导条件下的上调表达尤其明显。 1.5GmZnF1的克隆及拟南芥过表达株系的获得 从“圣豆9号”中首次分离了1个锌指蛋白基因CDS序列,命名为GmZnF1,序列长度分别为834bp,分别编码278个氨基酸。 克隆GmZnF1基因CDS全长,构建植物过表达载体,并转化筛选拟南芥,得到该基因的过表达纯系植株。 1.

By using a combined method of density functional theory(DFT), molecular mechanics(MM2) and statistics for two-dimensional(2D), as well as the comparative molecular field analysis(Co MFA) and comparative molecular similarity index analysis(Co MSIA) methods for three-dimensional(3D), theoretical studies on 2D/3D quantitative structure-activity relationships(QSAR) of 22 novel compounds of [1,2,4]triazolo[1,5-a] pyridinylpyridines acting as PI3 K inhibitors

against the human colon carcinoma cell line(HCT-116) HCS assay have been performed. Both the 2D- and 3D-QSAR models established from the random 18 compounds in training set show significant statistical quality

and satisfactory predictive ability(R2 = 0.821, q2 = 0.773 for 2D-QSAR, R2 = 0.966, q2 = 0.668 for Co MFA, R2 = 0.979, q2 = 0.753 for Co MSIA). The combined 2D- and 3D-QSAR studies suggest that the moderate-size, hydrophilic and electron-withdrawing group at R1 position, the bulky and hydrophobic group at R2 position, and the minor, hydrophobic, H-bond donor and electron-donating group at R3 position would enhance the anticancer activities. These obtained results help to insight into the action mechanism, and will serve http://www.selleckchem.cn/products/AP24534.html as a basis for the design of new potent anticancer agents.
表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)是一类具有独特病理和临床特征的恶性肿瘤。目前由于针对EGFR基因突变阳性NSCLC治疗中TKIs的应用,患者的生存期已超过三年,所以此类患者从诊断到治疗应进行全程管理。首先要进行分子检测,发现EGFR基因突变NSCLC,以避免失去EGFR-TKIs的治疗机会。研究证明,EGFR基因突变NSCLC任何线接受第一代抑制剂治疗,患者疗效及生存获益且耐受性良好。一代EGFR-TKIs耐药后根据失败模式选择后续局部或全身治疗,或根据耐药失败分子机制给予新的分子靶向治疗。对EGFR基因突变NSCLC应实施科学、有序的全程管理。
目的:观察佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达,探讨类风湿关节炎血管新生的机制。方法:30只大鼠随机分成正常对照组和模型对照组,模型对照组采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后第19天,采用酶联免疫吸附法检测大鼠HIF-1α、VEGF、微血管密度(MVD)的表达,采用Western 也许 Blotting检测滑膜PTEN、PI3K、AKT蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,血清MVD、VEGF、HIF-1α表达及滑膜PI3K、AKT升高,PTEN降低。相关性分析显示,PI3K、HIF-1α与MVD呈正相关,VEGF、AKT与足趾肿胀度呈正相关,PTEN与关节炎指数呈负相关。HIF-1α与VEGF呈正相关,PI3K与AKT呈正相关,PTEN与PI3K、AKT、VEGF呈负相关。结论:佐剂关节炎大鼠滑膜PTEN/PI3K/AKT通路表达失调是引起滑膜血管新生的机制之一。
The

phosphatidylinositol 3 kinase(PI3K) pathway is frequently altered in cancer, including ovarian cancer(OC). Unfortunately, despite a sound biological rationale and encouraging activity in preclinical models, trials of first-generation inhibitors of mammalian target of rapamycin(m TOR) in OC have demonstrated negative results. The lack of patient selection as well as resistance to selective m TOR complex-1(m TORC1) inhibitors could explain the disappointing results thus far. Nonetheless, a number of novel agents are being investigated, including dual m TORC1/m TORC2, Akt, and PI3 K inhibitors.

目的比较同期推量放射治疗(SIB)和全脑照射+三维适形放射治疗(WBRT+3DCRT)序贯治疗在肺癌脑转移患者中的应用效果。方法收集2006年1月至2011年4月间152例患者行SIB(研究组),146例肺癌脑转移瘤患者行WBRT+3D-CRT序贯治疗(对照组),比较两组患者的临床效果。结果研究组患者的客观缓解率、疾病控制率和1年生存率均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。研究组患者中位无进展生存时间明显延长,与对照组差异有统计学意义(P
[目的]观察全脑放疗与全脑放疗联合替莫唑胺治疗非小细胞肺癌(non-small

cell lung cancer,NSCLC)脑转移的疗效、生存时间及不良反应。[方法 ]60例NSCLC伴脑转移患者随机分为放射治疗组(放疗组30例)和放射治疗联合化疗组(联合组30例)。放疗组:全脑放疗剂量DT40Gy/20F/4W。联合组:放疗方法与放疗组相同,放疗同步替莫唑胺治疗剂量为75mg/(m2·d),d1~28。[结果 ]放疗组和联合组总有效率分别为43.3%(13/30)、63.3%(19/30)(P=0.07);中位生存时间放疗组为4.3个月,联合组为8.5个月(P0.05)。[结论]全脑放疗联合替莫唑胺可以作为NSCLC脑转移患者的治疗选择,治疗不良反应可耐受。
目的探讨利用细胞学涂片标本对晚期非小细胞肺癌(non-small cell 点击此处 lung cancer,NSCLC)患者进行棘皮动物微管相关蛋白样4-间变性淋巴瘤激酶(echinoderm microtubule-associated protein-like 4-anaplastic

lymphoma kinase,EML4-ALK)融合基因检测的可行性。方法收集48例NSCLC患者的细胞学涂片标本,HE染色常规诊断,免疫细胞化学染色分型,采用FISH技术检测EML4-ALK融合基因。结果 48例细胞学标本EML4-ALK融合基因阳性率为8.33%(4/48),其中31例NSCLC恶性胸腔积液标本中检测出3例EML4-ALK融合基因,17例NSCLC细针穿刺标本中检测出1例EML4-ALK融合基因。结论采用NSCLC细胞学涂片进行EML4-ALK融合基因检测,方法可靠,具有实用性。
肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤相关死亡率中居首位,其中80%是非小细胞肺癌(NSCLC),尽管近年来以外科手术为主的综合治疗取得了很大的进展,但NSCLC的5年生存率仍然只有10%~15%[1]。自上个世纪90年代,肺癌分子分型及靶向治疗研究不断发展,尤其是表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EG-FR)突变(18号、19号以及21号外显子敏感突变)
肺癌目前是全球最具威胁性肿瘤疾病之一,发病率或死亡率均居世界首位。随着人们生活环境逐渐恶化,每年新增肺癌患病数及新增死亡数都居高不下。近几年来,关于肺癌的治疗已经取得了比较大的进展,无论是患者生存期还是生活质量均有提高。随着分子生物学的飞速发展,人们对肿瘤的发生发展的认识已从传统的组织学水平逐渐深入到分子水平。因传统的标准化疗周期长、毒副反应大,为克服这一难题,国内外肿瘤专家发现了越来越多的
肺癌的规范化诊治对提高肺癌患者的预后具有重要意义。对肺癌诊疗指南的深入解读有利于加深临床医生对肺癌规范化诊治的理解。本文对国内外最新的肺癌诊治指南作简要的总结和点评,侧重于目前的诊疗共识和争议。
东南大学生物与医学纳米技术研究团队(以下简称研究团队),以发展针对重大疾病诊断与治疗的纳米材料、纳米技术及生物医学工程相关器件(器械)并积极推进临床应用为目标,研发医学影像增强用磁性、超声和金属等纳米材料及探针,以及显微医学影像仪器与肿瘤治疗用纳米药物与技术;探索可能存在的纳米生物效应;建立生物纳米材料安全性和生物相容性评价的新方法。为纳米生物材料及技术安全应用于临床铺垫基础,为建立和发展疾病诊断及治疗的新策略和方法创造条件,为人类健康事业做出贡献。
蛋白质可逆磷酸化修饰是细胞信号传导的主要事件。蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2是由非受体型蛋白酪氨酸磷酸酶11基因编码的蛋白酪氨酸磷酸酶,参与多条信号通路的活化。SHP2在肿瘤中特异性高表达,在肿瘤细胞的增殖、侵袭、转移以及耐药等方面都发挥了重要的作用,是肿瘤防治的一个潜在靶点分子。本文就SHP2与肺癌的发生、侵袭转移及耐药相关研究予以综述。
目的:了解非小细胞肺癌(NSCLC)的一线化疗药物的研究进展。方法:查阅近年来国内外相关文献,对NSCLC的一线化疗药物与靶向药物的研究进展进行归纳和总结。结果与结论:NSCLC一线化疗方案为以铂类药物为基础的两药联用,根据患者基因型的个体化用药方案可提高其有效率。针对表皮生长因子受体、间变性淋巴瘤激酶(ALK)、血管生成和多靶点的新型靶向药物正处于临床试验阶段,c-Met基因、环氧化酶-2、核转录因子-κB和生存素等肺癌相关基因和蛋白的发现将进一步扩大靶向治疗的获益人群及提高NSCLC化疗药物的有效性和安全性。
癌症是严重威胁人类生命和健康的疾病之一,已成为全球性的公共卫生问题。癌症筛查是肿瘤二级预防的主要手段,能够早期发现癌症,提高患者生活质量、延长生存期。但是,由于筛查成本相对较高,进行成本效果评估就显得尤为重要。全文通过检索国内外相关文献,搜索政府和机关网站,对目前公认适合筛查的宫颈癌、结直肠癌和乳腺癌,以及尚未推荐筛查的肺癌、肝癌、食管癌、前列腺癌、甲状腺癌的卫生经济学评估研究进行了系统回顾和总结。
Despite

PLX-4720 NSC683864 improvements in adjuvant therapies for gastric cancer in recent years, the disease is characterized by high recurrence rates and a dismal prognosis.

临床病例分析:观察原发性肝细胞肝癌患者中吸烟以及PDCD4表达情况的关系。由于影响肝细胞肝癌发病的因素很复杂,为了去除比较极端的因素,本研究制定了入选标准:1)男性;2)年龄＞30岁;3)HBsAg阳性;4)术前通过影像学检查除外肺转移及其他肝外转移;5)经历肝细胞肝癌手术切除治疗,术中确定剩余肝脏无肿瘤残余;6)术后病理证实为肝细胞肝癌,且标本切缘无肿瘤残余。严格准入条件以尽量减少可能的干扰因素。收集患者手术切除的肿瘤组织标本及癌旁无肿瘤细胞的正常组织标本,应用免疫组织化学法和western

blotting法检测肿瘤组织中及癌旁正常组织中PDCD4的表达情况。通过问诊确定患者吸烟情况,明确患者每天吸烟平均支数,以及吸烟总年数,换算成每年吸烟的包数(按照每包20支烟计算),同时综合考虑患者病情确诊时的年龄,手术中发现的肿瘤的大小,数目,门静脉及肝静脉侵袭情况,肝内胆管侵袭情况,肝脏总体情况,以及肿瘤组织的分化情况。组织在数据搜集后被编码,然后通过SPSS11.5统计学软件对结果进行曼-惠特尼U检验和菲希尔精确度检验,并以P＜0.05确认存在显著性差异。 2.培养正常人类肝细胞L02,肝癌细胞HepG2,应用针对人PDCD4的特异性抗体,通过western blot法及免疫细胞化学法检测在这二种细胞中PDCD4的表达情况的区别。根据以往研究提供的方法制备香烟提取物,简单来说,就是将两支不带过滤装置的香烟连接一个改良过的注射器,使燃烧产生的烟雾通过50ml不含血清的DMEM培养液,通过测定pH值来确定终止点,在pH值达到7.4的时候终止。然后通过孔径0.20μm滤膜除去细菌和杂质。应用5%浓度的CSE作用于人肝细胞L02不同时间,四氮唑蓝法(MTT)检测细胞活性增殖性改变情况,RT-PCR检测PDCD4基因改变情况。然后分别应用不同浓度(1%,5%,10%)的CSE作用于L02细胞4个小时,并应用5%CSE分别刺激L02细胞不同时间(1h,4h,16h,24h),通过western

selleck kinase inhibitor blot法检测观察PDCD4蛋白水平改变情况。通过使用新蛋白翻译抑制剂放线菌酮,结合应用5%CSE刺激L02细胞4小时,观察CSE对PDCD4蛋白的作用是发生在翻译阶段还是翻译后阶段。分别应用相关通路特异性阻断剂:PKC阻断剂Ro31-8425,MEK-ERK阻断剂PD98059,PI3K阻断剂LY294002,p38MAPK阻断剂SB203580,JNK阻断剂SP600125预处理细胞,然后应用5%CSE刺激L02细胞4小时,收集细胞提取蛋白通过western blot测定PDCD4蛋白含量改变情况,以观察上述通路在CSE对PDCD4作用过程中起的作用。 结果: 1.临床病例分析结果发现,在分析的68名男性并且不伴转移的原发性肝细胞肝癌患者中,吸烟组和不吸烟组的肿瘤组织中PDCD4表达无明显差异(P＞0.05)。但是在癌旁正常组织的比较中,吸烟组PDCD4的表达明显低于不吸烟组(P＜0.05).分别对吸烟组和不吸烟组的肿瘤组织和癌旁组织中PDCD4含量进行比较,发现在这两组中,肿瘤组织中PDCD4的含量较之癌旁正常组织中的均有所降低,不吸烟组的肿瘤组织和癌旁组织中PDCD4的差别更加显著(P＜0.01).对于其他相关因素比较,我们发现吸烟组的平均发病年龄比不吸烟组低,而不吸烟组患者的肝脏一般情况较差,二组在肝内门静脉,肝静脉及肝内胆管的侵及程度上没有显著性差异。

www.selleckchem.cn/products/DAPT-GSI-IX.html 购买AP24534 2.通过对正常肝细胞L02及肝癌细胞HepG2中PDCD4含量的比较,我们发现肝癌细胞中PDCD4蛋白含量较正常肝细胞减少,这一区别具有显著性差异(P＜0.05)。应用5%浓度的CSE作用于人肝细胞L02不同时间,MTT检测结果发现对细胞活性并无明显影响,RT-PCR结果显示PDCD4的mRNA的表达在CSE刺激下并无明显改变。通过不同浓度CSE的刺激和同一浓度不同时间的刺激,我们发现CSE刺激可以减少PDCD4蛋白水平,并且这一作用呈现一定的剂量和时间依赖性。通过结合应用新蛋白翻译抑制剂放线菌酮和5%浓度的CSE,我们发现同时应用这两者的情况下PDCD4蛋白水平随时间变化减少的更加迅速(P＜0.05),这说明CSE对PDCD4的作用可能是发生在翻译后。通过应用特异性通路阻断剂:PKC阻断剂Ro31-8425,MEK-ERK阻断剂PD98059,PI3K阻断剂LY294002,p38 MAPK阻断剂SB203580,JNK阻断剂SP600125预处理细胞,然后应用5%CSE刺激L02细胞4小时,通过western blot检测PDCD4表达情况,我们发现Ro31-8425,PD98059,LY294002均可明显改变CSE减少PDCD4含量的作用,而SB203580,SP600125没有明显作用。 结论: 1.原发性肝细胞肝癌中存在PDCD4含量减少的情况。吸烟与不吸烟者肿瘤组织中PDCD4含量没有明显差异,提示PDCD4作为肿瘤抑制物减少到一个临界点后发生了肝癌,之后可能由于某种反馈调节机制不再继续减少;吸烟者癌旁组织中PDCD4减少更加明显,提示吸烟肝癌患者预后较之不吸烟者可能更差。 2.

培养人脑微血管内皮细胞(hCMEC/D3),用不同浓度的LPS、p38MAPK和JNK信号通路抑制剂(分别为SB203580、SP600125)分别刺激细胞24h,用
目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路在络气虚滞型血管内皮功能障碍模型大鼠血清诱导的内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)表达中的作用及通络药物保护血管内皮,防治血管病变的作用机制。方法首先建立络气虚滞型血管内皮功能障碍(VED)大鼠模型,用模型大鼠血清体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞株,实验分为5个组:空白对照组、正常血清组、模型血清组、通心络(TXL)组、SB203580组。采用Western blot技术检测各组中F-actin、p38、磷酸化p38(phospho-p38)蛋白表达的变化。结果与空白对照组和正常血清组比较,模型血清组F-actin的蛋白表达…
目的探讨MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在瑞芬太尼预处理减轻心力衰竭大鼠离体心脏缺血再灌注损伤中的作用及其机制。方法成年雄性SD大鼠,尾静脉注射阿霉素,制备慢性心力衰竭模型,通过随机数字表将72只模型大鼠分为9组:假手术组(sham,n=9),缺血再灌注组(IR,n=9),瑞芬太尼预处理组(RPC,n=9),ERK抑制剂PD98059+RPC组(RPD,n=9),p38抑制剂SB203580+RPC组(RSB,n=9),JNK抑制剂SP600125+RPC组(RSP,n=9)以及抑制剂对照组PD(n=6)、SB(n=6)、SP(n=6)。化…
研究背景严重烧伤又称“烧伤病”,它所带来的问题不只是皮肤的损伤,还引起全身各系统和各脏器代谢和功能的一系列变化。近年来,有人称烧伤为“一种创伤后炎症反应性疾病”(a

post-trauma inflarnmato- ry disease)。“反应性”是生物固有的特性,对于多细胞、多脏器、多系统的高级生物来说,位于深部的细胞无法直接接受外部环境的刺激,在很大程度上根据来自其它细胞的信息调整自身的反应。细胞与细胞之间的信息交流除了靠神经系统之外,还通过信号细胞释放的各种信号物质,当这些物质作为“配体”与靶细胞的受体相结合时,就能改变靶细胞的代谢和功能。受体后信号调控是指对配体受体结合后发生的…
目的:探讨P38MAPK在大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤发病机制中的作用,观察肺组织中炎症因子水平、血中内毒素、淀粉酶含量等相关指标的变化及中药清胰汤的影响,进一步明确清胰汤的作用机理。方法:健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、抑制剂组、清胰汤组。除假手术组外,其余三组大鼠经胰胆管逆行注入去氧胆酸钠复制大鼠重症急性胰腺炎急性肺损伤模型。柳制剂组为术前1h腹腔注射SB203580,1mg/Kg。清胰汤组于术前1h及术后清醒时灌胃,1ml/kg。术后24h采取标本做病理检查和各项指标检测。肺组织ICAM-1、P38MAPK的检测方法采用Western 确认细节 一般 Blot法。肺组织TNF-a检测采用放免法。肺…
目的:观察p38MAPK信号通路抑制剂–SB203580对内毒素休克大鼠生物喋呤／NO表达的影响,并探讨 p38MAPK信号通路在生物喋呤诱生中的作用机制及意义。方法:采用内毒素休克模型,56只大鼠随机分为正常对照组(n=8)、内毒素休克组(n=32)和SB203580拮抗组(n=16),留取肝、肺、肾组织测定三磷酸鸟苷环水解酶I(GTP-CHI)与诱生型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达,同时测定血浆与相应器官中BH4、
目的动脉粥样硬化(AS)已公认是一种炎症反应性疾病,诱导型环氧合酶(COX-2)及CD40与其配体

获悉更多 (CD40L)参与AS进程的多种炎性因子调节。CD40L对COX-2表达影响的研究尚不多见,为此,我们观察了 rhCD40L刺激对U937细胞表达COX-2的影响,并从细胞内信号转导通路的水平探讨其潜在的机制。方法以终浓度为0．05、0．1、0．2、0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激U937细胞;0．4μg／ml的rhCD40L分别刺激3、6、12、24h;RI:PCR及Westen blot分别检测 COX-2mRNA和蛋白表达,ELISA检测PGE2活性代表COX- 2酶活性。分…
目的探讨p38蛋白激酶对LPS诱导肺泡巨噬细胞活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580(p38蛋白激酶抑制剂)干预组、PDTC(NF-κB抑制剂)干预组和SB203580+PDTC干预组。分别采用免疫细胞化学和蛋白质印迹检测NF-κB、p38蛋白激酶和NF-κB 抑制蛋白(Ⅰ-κB)的表达。结果 LPS刺激肺泡巨噬细胞胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强,胞核染色阳性细胞百分比分别由正常对照组的(7．34±1．33)％、(6．12±2．15)％上升到(38．52± 9．71)％、(35．20±8．51)％,而Ⅰ-κB的表达较正常对照组显…
目的探讨P38MAPK与iNOS在肾脏缺血预处理时两者的上下游关系,旨在阐明肾脏缺血预处理延迟保护的可能机制。方法选用180-220g雄性wistar大鼠60只． SB203580(P38MAPK特异性抑制剂),氨基胍(AG)(iNOS特
目的:乳腺癌是女性最普遍的恶性肿瘤,乳腺癌转移是造成患者死亡的主要原因,迄今为止乳腺癌转移的发病机理尚不清楚。我们前期建立了具有高转移倾向的乳腺癌 LM—MCF-7细胞系。本文应用MLCK的特异性抑制剂 ML-7作用LM—MCF-7细胞,旨在进一步探讨ML-7在 LM—MCF-7细胞生长、浸润、运动和凋亡等方面的作用。此外,还应用多种激酶相关抑制剂,采用免疫荧光、免疫印迹等实验方法对上述作用的机制和相关信号传导途径进行了深入研究。方法:应用20 μmol／L ML-7作用于LM— MCF-7细胞,测定细胞生长曲线并应用MTT检测细胞的增殖变化,台盼兰染色检测细胞的死亡率,应用Annexin V…
目的观察红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)增殖的影响,并探讨其作用机制。方法用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性,用蛋白免疫印迹测定 p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)磷酸化表达。结果不同浓度红茶多酚对牛主动脉内皮细胞(BAECs)均有明显抑制作用,呈剂量时间依赖关系;红茶多酚(0.

1的关系、K_(Ca)3.1与MCP-1之间的关系并探讨其信号转导通路。结果:100μmol/L PA上调体重指数(body mass index,BMI)位于20~27.9 kg/m~2的T2DM患者PBMCs K_(Ca)3.1的表达并促进其跨内皮迁移,对BMI≥28 kg/m~2的T2DM患者PBMCs无影响;K_(Ca)3.1特异性阻滞剂TRAM-34、NF-κB阻滞剂PDTC(100μmol/L)和Bay11-7082(10μmol/L)抑制PA诱导的BMI位于20~27.9 kg/m~2的T2DM患者PBMCs跨内皮迁移;TRAM-34和K_(Ca)3.1特异性si RNA显著减少PA(200μmol/L)诱导的THP-1细胞跨内皮迁移及THP-1细胞中MCP-1的分泌和表达,anti-TLR2/4(4 Venetoclax制造商 mg/L)、p38MAPK抑制剂SB203580(10μmol/L)及SB202190(10μmol/L)、PDTC(100μmol/L)和Bay11-7082(10μmol/L)显著减少PA诱导的THP-1细胞中K_(Ca)3.1和MCP-1的表达。结论:PA通过TLR2/4-p38MAPK-NF-κB通路上调K_(Ca)3.1促进MCP-1的表达,进而诱导单核细胞的跨内皮迁移。
目的:研究Toll样受体4(TLR4)在脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用及其可能的分子机制。方法:雄性SD大鼠8只,随机分为假手术组(Sham组)和盲肠结扎穿孔组(CLP组),各4只。CLP组大鼠采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒血症动物模型,Sham组除不行盲肠结扎穿孔外,其余处理同脓毒血症组,造模后24h处死大鼠取肾组织。体外培养大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E),以1μg/ml

selleck化学 LPS刺激不同时间(5,15,30,60min),采用免疫荧光、Western blot法检测大鼠肾组织及肾小管上皮细胞TLR4的表达及分布,Western blot法检测细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路(包含p38、JNK两条主要通路)及Iκ-B磷酸化情况。TLR4抑制剂TAK-242(5mol/L)及MAPK通路抑制剂SB202190(10μmol/L)、SP600125(25μmol/L)预处理NRK-52E后,分别检测TLR4蛋白表达、MAPK信号蛋白及I-κB磷酸化水平。结果:1免疫荧光结果显示TLR4主要表达在大鼠肾小管上皮细胞;正常肾小管上皮细胞TLR4主要分布于细胞质。2Western

blot结果显示随LPS刺激时间的增加,肾小管上皮细胞TLR4表达显著升高(P<0.05)。5SB202190、SP600125分别预处理NRK-52E细胞,均可显著降低LPS诱导的I-κB磷酸化(P
近年来对脂多糖（ＬＰＳ）介导细胞激活的信号转导过程已取得实质性进展。ＬＰＳ与血浆ＬＰＳ结合蛋白（ＬＢＰ）结合被运输到单核巨噬细胞表面，与ｍＣＤ１４受体结合引起细胞激活。ＭＡＰＫ参与了ＬＰＳ激活细胞产生肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）等活性物质的细胞内信号转导过程。ｐ３８ＭＡＰＫ对ＴＮＦα等细胞因子具有重要的调节作用。对ＬＰＳ激活细胞的信号转导研究可能为治疗内毒素休克提供新的理论和思路。
为探讨ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导单核细胞株Ｒａｗ Dabrafenib ２６４．７凋亡中的调控作用．应用流式细胞检测术、透射电镜技术、ＤＮＡ 凝胶电泳、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、激酶活性测定检测ｐ３８蛋白激酶在热损伤诱导细胞凋亡中的作用．结果显示，热损伤后５ ｍ ｉｎ，ｐ３８即被激活，３０ ｍ ｉｎ 时达到最高水平，然后逐渐下降，２ ｈ 达基底水平；热损伤后３ ｈ 细胞凋亡率开始明显增高，ｐ３８蛋白激酶活性增高是细胞凋亡发生之前的事件；进一步观察了ｐ３８特异性抑制剂ＦＨＰＩ对细胞凋亡的影响，发现ＦＨＰＩ可以抑制热损伤诱导的细胞凋亡．上述结果提示，ｐ３８参与介导热损伤诱导的Ｒａｗ

２６４．７细胞凋亡．
目的探讨丝裂素活化蛋白激酶家系（ＭＡＰＫｓ）在大鼠心脏缺血预处理（ＩＰＣ）保护中的作用。方法在离体灌注的ＳＤ大鼠心脏缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）模型上，观察ＩＰＣ对于Ｉ／Ｒ后损伤的影响，并观察ＭＡＰＫｓ中三种激酶［细胞外信号调节激酶（ＥＲＫｓ）、蛋白激酶ｐ３８（ｐ３８）、应激活化蛋白激酶（ＳＡＰＫ）］活性的变化及其与保护作用的关系。结果ＩＰＣ明显改善大鼠Ｉ／Ｒ后的心脏功能，减少Ｉ／Ｒ造成的心肌肌酸激酶漏出及ＡＴＰ消耗。ＩＰＣ过程ＥＲＫｓ和ｐ３８激酶的活性分别较单纯Ｉ／Ｒ组高７３％（Ｐ＜００１）和６９％（Ｐ＞００１）；而心肌ＳＡＰＫ的活性无明显改变。预先给予酪氨酸激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ和ＥＲＫｓ抑制剂ＰＤ０９８０５９可分别消除ＩＰＣ的上述保护作用，而ｐ３８抑制剂ＳＢ２０２１９０对ＩＰＣ无明显影响。结论ＥＲＫｓ激酶参与了ＩＰＣ的心肌保护作用，而ｐ３８和ＳＡＰＫ未参与ＩＰＣ保护机制。
自噬(autophagy)是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,在稳定细胞内环境中发挥着重要作用.研究发现,自噬影响血管功能,与血管疾病的病理生理进程密切相关.本文从自噬对血管功能的影响,与血管相关疾病(如动脉粥样硬化、腹主动脉瘤、肺动脉高压、糖尿病血管并发症等)的关系及药物对血管壁细胞自噬的调控进行综述,希望从自噬的角度来了解血管的功能和病变及一些疾病的发生发展进程,为治疗血管相关疾病提供新的思路.

5、2.5、5、10μmol/L)培养对数生长期细胞24h,分别收集5×105个细胞,预冷4℃后用缓冲液重悬,洗涤调节至1×105／ml,按AnnexinV:PE试剂盒说明行流式细胞仪(FACS AUY-922订单 BIVA option, Becton Dickinson)检测。 4、细胞周期检测：对数生长期细胞,按上述分组加入不同药物浓度,培育24小时后,收集细胞,缓冲液洗涤,加70%酒精重悬固定,4℃过夜,缓冲液洗涤,以1ml含有lmg/ml RNA酶及50μg/ml PI的缓冲液重悬,室温暗箱培育30分钟后按PI试剂盒说明行流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)检测。 5、细胞内活性氧化物检测：对数生长周期细胞,1×104/孔种入96孔板,细胞培养24h后进行实验。按上述分组加入不同药物浓度,每组4个复孔,培养24h。每空加入5μmol/L溶于缓冲液的CM-H2DCFDA,培育30分钟,酶标仪(BIO-RAD

Model680)485/530nm波长测定吸光度值A。 6、聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白检测：细胞分组加入不同药物浓度(0、0.5、1、2.5μmol/L),培育24小时后,以预冷的缓冲液洗涤,后用蛋白裂解液裂解,4℃下3000g离心10分钟,以蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度(Pierce BCA protein assay kit)。30μg蛋白及加样缓冲液以同等体积混合,95℃加热5分钟,加样于聚丙烯酰胺凝胶行凝胶电泳,然后于4℃下,以200毫安电流转移3小时,将蛋白转移至硝酸纤维素膜上。纤维素膜经洗涤、封闭、一抗孵育、二抗孵育、清洗后按蛋白显色试剂盒(BioRad enhanced chemiluminescence kit)说明行显色,相关蛋白水平用beta肌动蛋白作平衡。 7、白花丹素的药物吸收及亚细胞分布的检测：用共焦显微镜检测白花丹素在A549及H23细胞的药物吸收过程及亚细胞分布。细胞种入8孔方格玻片。培养过夜后,加入白花丹素,作用超24小时。用PBS洗涤细胞3次,并用para-formaldehyde固定。用DAPI染色DNA。盖上盖玻片,用指甲油封口。用Leica TCS SP2激光扫描共焦显微镜检测,检测波长405nm SAHA HDAC (DAPI),488nm(白花丹素)。 8、细胞自噬检测：对数生长周期细胞,5×104/孔种入24孔玻璃底板,细胞培养24h后进行实验。设空白对照组、不同药物浓度白花丹素(0.5～10μmol/L)及2.5μmol/L白花丹+促细胞自噬/抗细胞自噬药物组,每组4个复孔,每孔加入对应药物及15μl

CellLight Lysosome-RFP试剂,培养24h。用Leica TCS SP2镭射共焦显微镜以555/584nm波长检测。以WST-1实验作平衡。 9、细胞凋亡与细胞自噬间的关系与影响：对数生长周期细胞,1.5×105/孔种于6孔板,培育过夜。设空白对照组、不同药物浓度白花丹素(0.5～10μmol/L)及2.5μmol/L白花丹+促细胞自噬/抗细胞自噬药物/抗细胞内活性氧化物生成药物组,加入对应药物后培育24小时,胰蛋白酶收集细胞,100g离心5分钟,去掉上清,重悬后细胞等分为2份,缓冲液洗涤,一份加Annexnin-ATTO647N:PI试剂,黑暗中培育10分钟。用缓冲液洗涤一次,用190μl结合液重悬,加10μl浓度为20μg/ml的PI,用流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)作细胞凋亡检测；另一份洗涤后用1-assay buffer(Enzo Life Sciences Inc, Farmingdale, No.ENZ-51031-K200)重悬,离心收集细胞,用250μl的加了5%的牛血清的无酚红的培养液(Invitrogen, Carlsbad, No.1294895)重悬,并加入250μl稀释的Cyto-ID Green试剂(Enzo Life Sciences Inc, Farmingdale, No. ENZ-51031-K200)混合,37℃黑暗中培育30分钟,离心收集细胞,1-assay buffer洗涤,用500μl新鲜的assay buffer重悬,流式细胞仪(FACS BIVA option, Becton Dickinson)作细胞自噬检测。 结果： 白花丹素对于A549及H23的半抑制浓度分别为10.87μmol/L及7.80μmol/L,可引起-G2/M细胞周期停滞,cyclin B1及Cdc2水平均明显下降,在A549细胞中,白花丹素使p53的水平升高,P21的表达也以药物浓度依赖的方式上升,受白花丹素处理的H23细胞中却无此表现。

白花丹素诱导A549及H23细胞的凋亡,白花丹素处理的各组A549及H23细胞均有明显的Bax表达水平的升高,而Bcl-2的表达则明显降低,Bax/Bcl-2比值的上升,且该作用有浓度依赖；在A549细胞中以浓度依赖方式引起PUMA表达的明显上升,但在H23细胞中无此作用；白花丹素在两种细胞中均诱导细胞色素C的释放；断裂的caspase-3(Asp175)及caspase-9(Asp315)在A549及H23细胞中均被白花丹素以浓度依赖方式激活。 Wortmannin购买 白花丹素增加细胞内活性氧化物的水平。用细胞内活性氧化物抑制剂：5mmol/L的NAC、100mmol/L的维生素C或1mmol/L的GSH预处理后的A549及H23细胞,其细胞内活性氧化物的水平明显下降。 白花丹素诱导A549及H23细胞的细胞自噬,在A549及H23细胞中,白花丹素均以浓度依赖的方式明显减低P13K(p55)的Tyr199位点的磷酸化、增加p38在Thr180/Tyr182位点的磷酸化、减少Akt的Ser473位点的磷酸化、降低mTOR在Ser2448位点的磷酸化。白花丹素以浓度依赖方式明显诱导beclin1在两种细胞的表达、引起LC3-I及LC3-Ⅱ水平的升高。在两种细胞中,用20mmol/L的SB202190或SB203580处理,均能加强由白花丹素诱导的自噬反应。Chloroquine, bafilomycin及wortmannin抑制白花丹素诱导的自噬反应。：20mmol/L的SB202190及SB203580均明显加强白花丹素诱导的p38磷酸化作用,明显加强白花丹素诱导的mTOR的磷酸化的抑制作用,加强诱导LC3-I及LC3-Ⅱ水平的升高的作用。特异性p38MAPK抑制子及自噬诱导子SB202190,及自噬抑制子wortmannin均可增强A549及H23细胞的基础凋亡,但抑制白花丹素诱导的细胞凋亡。 白花丹素处理0.