However,recent studies established the role of human epidermal growth factor receptor 2(HER2)in clinical management.Trastuzumab,an antiHER2 monoclonal antibody,acquired

a main role in advanced gastric cancer harboring HER2 overexpression and/or amplification improving survival to 17.1 mo according to trastuzumab for gastric cancer phaseⅢtrial results.Also,new promising drugs,such as c-Met inhibitors,are in development and assessment for this setting.Certainly,novel 也许 drugs will emerge in the next feel years for help oncologists improve clinical management of advanced gastric cancer providing higher survival and quality of life.In this mini-review we will discuss some issues in this regard and provide an actual overview of this setting.
目前国际创新药物研发面临着极为严峻的挑战,包括政策、经济、监管、科学技术等方面,本文从新药的研发投入、研发产出、临床试验、企业研发模式和商业模式转变等不从侧面反映了当前国际新药研发现状。人类基因图谱绘制、对人体生化过程、分子信号通路及蛋白质结构的不断了解、计算机建模、分子成像等先进技术等为新药研发带来了革新动力。后”重磅炸弹药物”时代即将来临——即将患者分为不同治疗亚群的个体化治疗时代。个体化药物将适应新的全球研发环境,成为未来新药研发热点趋势。
近年来,许多研究者在体外实验或者临床试验中发现肝细胞生长因子受体对许多肿瘤的发生和发展起到了关键的作用。HGF/c-MET信号通路的靶向治疗将会对这些肿瘤有效。本文对近几年来HGF/c-MET信号通路的研究进展,包括该信号通路的基本信息、在相关肿瘤中的作用、临床治疗进展和遇到的困难以及相关对策进行综述。
肺癌仍然是世界上最致命的肿瘤。每年有超过100万人因此病丧生[1]。(肺)癌最常见的死因是转移癌。肿瘤细胞在起病部位之外的组织中传播和生长,肿瘤负荷迅速增加[2]。非小细胞肺癌(non-small

Selleckchem E7080 哪里 cell lung carcinoma,NSCLC)约占所有肺癌病例的85%,并且是全球癌症相关死亡的首要原因。约70%的患者在就诊时已达疾病晚期,
2011财政年度(2010年10月1日—2011年9月30日),FDA批准了35个新药,其中许多是开创性的,包括两个丙型肝炎治疗药物,一个晚期前列腺癌药物,30年来第一个治疗霍奇金淋巴瘤药物和50年来第一个治疗红斑狼疮新药。这些药物被批准的速度也令人注目,其中24个先于世界其他国家批准。同时,FDA通过快速审批和灵活的临床试验要求,大大降低了试验耗费。FDA为促进创新药物更快为患者服务的努力值得借鉴和效仿。
本文综合分析近十年来分子靶向抗肿瘤药物的历程,回顾各类分子靶向抗肿瘤药物的特点,提出分子靶向抗肿瘤药物开发中值得关注的几个问题:如药物的毒副作用、耐受性,个体化治疗与生物标志物,以及预测敏感患者生物标志物研究等。
肺腺癌是肺癌最常见的组织学类型,约占所有肺癌的50%。肺腺癌不同的组织亚型在临床、影像学、病理学和遗传学上有很大差异。近年来,尽管对这一类肿瘤的基础和临床研究取得了明显进步,但仍需要对肺腺癌亚型有一普遍接受的标准。原来的分类,包括2004年WHO分类既不能很好地反映肿瘤分子生物学、病理学和影像学的新进展,也不能
据相关资料统计,2011年美国FDA共批准35个新药上市,其中生物技术类药物10个(以”*”表示),其余为新分子实体,而按疗效可分为6类:抗肿瘤药物(7个,占20.0%)、抗感染药物(6个,占
2011年下半年,全球首次批准了7个新分子实体和3个新生物制剂(表1),其中包括1个复合口服避孕药、1个精神神经系统疾病治疗药物、5个抗肿瘤药物、1个免疫系统疾病治疗药物、1个外科手术用药和1个眼科疾病治疗药物。2011年下半年,全球还批准了首个脐带血源性产品,即用于异基因造血干细胞移植的Hemacord。
2011年美国食品和药品管理局(FDA)批准了24个新分子实体(new

molecular entity,NMEs)和6个新生物制剂(biologic license applications,BLAs),该数字较2010年16个NMEs和7个BLAs多30.4%。按照药物作用分类,抗肿瘤药8个(26.7%),精神系统用药4个(13.3%),心血管系统用药1个(3.

白藜芦醇诱导后细胞胞体收缩，伸出长突起，类似神经元。免疫荧光显示MSCs及对照组细胞表达神经元NSE蛋白，诱导后细胞NSE、MAP-2蛋白阳性，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。免疫印迹显示MSCs及对照组细胞轻度表达nestin、NSE蛋白，随着诱导时间延长，nestin的表达渐减弱，NSE和MAP-2的表达渐增强，但诱导前后细胞始终未表达胶质细胞GFAP蛋白。 PR-171分子量 2.正常培养的MSCs不表达初级纤毛。经过预诱导或饥饿处理24h后，MSCs表达初级纤毛、蛋白Ptc1、Smo和Gli1，其中Smo和Gli1位于胞浆，Ptc1位于初级纤毛。白藜芦醇诱导后，Smo从细胞浆进入初级纤毛，Gli1从细胞浆进入细胞核，同时，Smo、Gli1蛋白的表达增加。在正常培养时，白藜芦醇不能促使Smo移位以及MSCs向神经元样细胞分化。当MSCs表达初级纤毛时，白藜芦醇以及Smo激动剂SAG可使Smo从胞浆进入初级纤毛，同时伴随MSCs向神经元样细胞的分化和蛋白Smo、Gli1的表达增强；加入抑制剂环杷明后，Smo仍主要表达于胞浆，蛋白Smo、Gli1的表达降低，MSCs向神经元样细胞的分化受抑制。

结论：1.白藜芦醇在体外可诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞。 2. MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号，初级纤毛介导Shh信号调控MSCs的神经元样细胞分化。
目的胃癌在我国的发病率呈持续上升趋势,严重影响人类健康。目前研究证实, Hedgehog(Hh)信号通路可通过调控细胞周期，粘附侵袭，血管形成，凋亡等细胞事件参与多种肿瘤的的发生进展,胶质瘤相关癌基因1（Glioma-associated oncogene homolog，Gli1）作为该通路的效应因子,成为评价该通路活化程度的关键因子。血小板源性生长因子-D（Platelet-derived growth factor D，PDGF-D）作为强烈的促肿瘤血管形成因子，已被证实在多种肿瘤中异常高表达。但是Hh信号通路是否可以通过调控PDGF-D的表达来影响肿瘤血管形成尚不明确。本研究拟通过使用Hh信号通路特异阻断剂环巴明（Cyclopamine）处理胃癌SGC-7901细胞，观察处理前后Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白水平的变化及癌细胞体外形成血管管腔样结构的能力，来探讨Hedgehog信号通路调控肿瘤血管形成的可能机制。 方法常规培养人胃癌SGC-7901细胞和人脐静脉内皮细胞（Human umbilical vein endothelial cell，HUVEC），将SGC-7901细胞分为对照组A（未给药）、实验组B（环靶明终浓度5μmol/L）及实验组C（环靶明终浓度10μmol/L），培养48h后，免疫荧光检测各组Gli1和PDGF-D在SGC-7901细胞中的表达；通过小管形成试验和血管拟态试验检测细胞处理前后血管形成能力的变化； Ribociclib临床试验 RT-PCR和Western-Blot检测细胞处理前后Gli1、PDGF-D的mRNA和蛋白表达变化，并对二者mRNA和蛋白表达水平进行相关性分析。

结果Gli1和PDGF-D在各组SGC-7901细胞中均有表达；实验组SGC-7901细胞的体外血管形成能力较对照组下降，且呈剂量依赖性，差异具有统计学意义（P<0.05）；实验组Gli1和PDGF-D的mRNA和蛋白表达较对照组均受到显著抑制，差异具有统计学意义（P
研究背景： 目前食管癌（Esophageal cancer）是全世界最常见的恶性肿瘤之一，在我国尤为突出，是发病率最高的国家。食管癌恶性程度高，且大部分患者得到临床确诊后已属晚期，预后极差，对于早期患者手术尽管是目前治疗的首先方式，但手术后容易复发及转移。癌细胞早期容易侵袭转移是其主要原因，另外，术后缺乏敏感的抑制肿瘤细胞的药物，常用的化疗药物靶向效应不强，副反应较重等也是食管癌患者生存率较低的重要原因之一。Hedgehog（Hh）信号通路由Hh-Ptch-Smo-Gli级联构成，当Hh蛋白配体与膜受体Ptch结合时，可以消除膜受体Ptch对Smo的抑制效应， 这个 Smo的激活又可进一步激活核转录因子Gli，从而诱导下游目标基因的表达。近年研究显示Hh信号通路与人类乳腺癌、肝癌、胃癌、胰腺癌等多种肿瘤的发病及转移密切相关，食管癌的Hh通路高度激活也已得到证实，但Hh通路与食管癌细胞转移能力的关系却缺乏深入的研究。已证实血管内皮细胞生长因子（VEGF）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与食管癌的发生、发展、转移密切相关，也有研究表明二者与Hh通路有密切联系，但具体作用机制的研究仍处于初级阶段。

目的： 本实验以食管癌EC109细胞系为研究对象，利用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）处理EC109细胞，然后观察细胞转移能力的变化及转移相关因子MMP-9、 VEGF蛋白表达水平的影响，并分析其可能的机制，为临床食管癌靶向药物的研究提供理论与实验依据。 方法： 1.培养EC109细胞为实验对象，用Hh信号通路特异性阻滞剂环巴胺（Cyclopamine）作用EC109细胞后，MTT法观察环巴胺对EC109细胞的抑制作用，并计算出相应的半数抑制率（IC50）。 2. Transwell小室法观察经环巴胺处理后EC109细胞的迁移、侵袭能力的变化。 3.体外血管生成实验观察环巴胺对EC109细胞在体外血管形成能力的影响。 4. RT-PCR方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后的Gli-1mRNA表达变化。 5.Western blot方法检测食管癌细胞经环巴胺处理后Gli-1、MMP-9、VEGF蛋白的表达变化。 结果： 1.环巴胺处理EC109细胞后可以抑制其增殖及生长，细胞由饱满的梭形贴壁生长状态转变为轮廓不清的圆钝半贴壁状态，在一定浓度下抑制率随浓度增高而增大且具有相关性，且干预的时间越长，其抑制率也随之加大，在相当的范围内具有药物作用时间和作用浓度依赖性。作用2天后的IC50为12μmol/L。 2.在Transwell小室实验中我们发现，环巴胺阻断Hh信号通路后，与对照组相比，食管癌细胞的体外迁移、侵袭及血管形成能力显著下降，迁移出小室微孔膜的细胞数明显减少（32.80±6.77）vs（98.40±10.08），侵袭穿膜细胞数也明显减少（26.20±4.58）vs（83.40±8.65）；血管形成数减少（8.60±2.70）vs（19.40±4.

5 mg/kg);Ⅱ组尾静脉注射等量的生理盐水。 2、标本采集:每组分为①肺泡灌洗组和②非肺泡灌洗组两个亚组。

灌洗组在各时间点分别麻醉动物后以生理盐水行支气管肺泡灌洗,留取支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluids,BALF)测定BALF中白细胞计数; 非灌洗组各时间点处死动物,取部分右肺制作肺组织匀浆,检测磷酸化P38 MAPK,MMP-2、MM P-9、TIMP-1 mRNA,肺组织匀浆总蛋白;余下右肺组织称量后置于烤箱中测肺湿/干重比。左肺固定、包埋、切片,用于常规HE染色,观察肺组织病理学变化,拍照存档; 3、肺组织磷酸化P38 MAPK(p-P38 MAPK)检测(Western blot法):采用改良RIPA缓冲液常规提取肺组织中蛋白质,BCA比色法(Bio-Rad蛋白定量检测试剂盒)测定所提取蛋白的浓度。各组蛋白取样100μg进行SDS- PAGE电泳,电转移至PVDF膜。以封闭缓冲液室温封闭1 h,phospho-P38 MAPK一抗(1∶1000,购自美国SANTA CRUZ公司) 4℃孵育过夜,二抗(1∶2000)孵育1 h,ECL显色。用Q550CW计算机图像分析系统对蛋白条带进行分析处理,蛋白含量用目的条带校正容积(Adj volume) /GAPDH校正容积(Adj volume)表示。 还有 4、肺组织MMP-2、MM P-9、TIMP-1 mRNA检测(RT-PCR法):(1)按TRIZOL总RNA提取试剂(美国Invitrogen公司)说明书操作。用RNA提取液( TRIZOL Reagent )从肺组织中提取总RNA。(2)逆转录合成互补DNA ( cDNA)第一链。(3) PCR扩增(引物及扩增条件详见实验步骤)。(4)产物分析:扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,用Q550CW计算机图像分析系统进行电泳条带分析。目标产物mRNA表达水平以目的条带校正容积(Adj volume) /GAPDH校正容积(Adj volume)表示。 结果: 1.一般状况:空气组大鼠精神状态佳、活动灵活,实验期间体重增长稳定;高氧组大鼠3天后精神反应差,7天后体重增长不明显,呼吸急促,活动迟缓;SB203580干预组大鼠精神状态稍差、活动稍减少、体重增长不明显,呼吸稍急促。

2.肺组织病理切片:高氧组3天时肺泡腔内有明显出血和炎性细胞渗出,7天时损伤加重,肺间隔增宽,肺组织结构紊乱。SB203580干预组与高氧组比较炎症改变减轻,肺间隔增宽不明显。 也许 3.肺湿/干重比(W/D):实验3天,高氧组较空气组增高(5.5104±0.5001 vs 4.2706±0.3884,p0.05),7天时明显下降(0.9297±0.0642 vs 1.2226±0.1751,p
第一部分不同浓度胰高血糖素样肽-1对乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的作用研究 目的：通过体外培养乳鼠心肌细胞建立缺氧／复氧(H／R)模型,给予不同浓度的胰高血糖素样肽-1进行干预,观察胰高血糖素样肽-1对心肌细胞缺氧／复氧损伤的作用。 方法：1用胰蛋白酶消化法体外原代培养乳鼠心室肌细胞,通过倒置相差显微镜形态学观察以及心肌Q肌动蛋白免疫荧光法进行鉴定。2选用培养72h的单层心肌细胞,实验分为以下7组：正常对照组、单纯H／R组、H/R+GLP-1(0.1nmol／1)组、H/R+GLP-1(1nmol／1)组、H／R+GLP-1 selleck激酶抑制剂 (10nmol／1)组、H/R+GLP-1 (100nmol／1)组、H/R+GLP-1 (1000nmol／1)组。 3化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)的活性,硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛(MDA)含量。4通过流式细胞术来检测心肌细胞的凋亡。 结果：1经各项鉴定培养细胞为心肌细胞,且纯度可达90%以上；2 LDH的活性、MDA含量及SOD的活性：与正常对照组相比,单纯缺氧／复氧后,LDH的活性显著增加(83.76±12.21vs16.84±4.43,P＜0.05),超氧化物歧化酶(SOD)的活性明显降低(20.00±4.74vs64.52±6.47,P＜0.05),丙二醛(MDA)含量显著增多(53.74±8.41vs3.90±0.90,P＜0.05),GLP-1预处理后进行H／R,可较大程度地逆转上述指标变化,与H／R组相比均具有显著性差异(P＜0.05),并且随着GLP-1浓度逐渐增加至10nmol／1(0.1nmol／l、1nmol／l、10nmol／1)时LDH活性逐渐下降,MDA含量逐渐下降,SOD的活性逐渐升高,当GLP-l浓度大于1Onmol／l随着浓度增加(10nmol／l、100nmol／l、1000nmol／l),与10nmol／l组相比上述指标改变无统计学意义(P＞0.05)。3心肌细胞凋亡率：正常对照组细胞集中在B3区,在B4区和B2区内几乎无分布,凋亡率为1.2±2.08；H／R组出现大量凋亡细胞,并有部分坏死细胞,其凋亡率为29.1±4.78,较正常对照组显著升高,P<0.05),且在一定的浓度范围内即GLP-1≤10nmol／l时,心肌细胞的凋亡率的下降呈现浓度依赖性(P
钙能够把细胞表面的信号传递给细胞内各过程,从而在动物的细胞里起着一种近乎全能离子信使的作用。体内外的大量研究提出钙有抗肥胖作用,但有些研究者在其他动物模型中却未发现钙的减重现象。p38

MAPK信号通路作为促分裂原活化的蛋白激酶信号通路三条主通路之一,近年来被认为与脂代谢密切相关,且众多研究显示p38 MAPK信号通路的激活与细胞内钙离子[Ca~(2+)]i浓度变化之间存在直接联系。基于钙、p38 MAPK与脂代谢三者之间的交互关系,本试验旨在研究钙调节脂代谢的作用及机理,并尝试探讨钙信号,p38 MAPK信号通路调节脂代谢的潜在分子机制。主要研究结果如下: 1.高脂饲喂小鼠日粮中添加钙显著减少小鼠增重(P<0.01)和SB组(P<0.

05岁。其中肝郁痰凝证95例,占80.51%,冲任失调证13例,占11.02%,正虚毒炽证10例,占8.47%。

经统计学分析,Her-2阳性乳腺癌的导管内癌、淋巴结转移情况、年龄、TNM临床分期在乳腺癌中医辨证分型的分布,差异具有统计学意义(P0.05)。 结论： 年龄、TNM临床分期,导管内癌、淋巴结转移情况与Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型存在相关性,可作为Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型的影响因素。其中,在Her-2阳性乳腺癌三组中医辨证分型中,冲任失调证的年龄较大,肝郁痰凝证的年龄较小,正虚毒炽证主要集中在41-60岁之间；正虚毒炽证的TNM分期较其它两组分期更晚；肝郁痰凝证中导管内癌阳性率最高,冲任失调证次之,正虚毒炽证最低；正虚毒炽证的淋巴结转移阳性率最高,肝郁痰凝证次之,冲任失调证最低。 也许 病理组织学分级,ER、PR、Ki-67的表达状态,小叶内瘤变、淋巴管血管侵犯、微钙化灶的有无与Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型无相关性,不能作为Her-2阳性乳腺癌中医辨证分型的影响因素；
背景： 随着分子靶向药物在临床中的应用，肿瘤对药物的耐受成为制约其疗效的重要因素，而对于临床试验的药物，药物耐受更是导致其失败的重要原因之一。肿瘤耐药机制研究成为肿瘤生物学和治疗学的重要领域。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)家族成员参与多种细胞信号通路，调控着众多肿瘤发生发展中至关重要的生物学过程，包括细胞生长、存活、增殖、血管生成、迁移和转移等，且PI3K通常以异常活化的形式存在于人类许多肿瘤中，因而PI3K是个具有巨大潜力的药物治疗靶点。其中PI3K亚型的扩增和突变是导致该信号通路过度活化的重要原因，多个靶向性候选药物正处于积极的临床研究中。PI3K处于庞大的细胞信号传导网络中，与多个信号通路存在交互通话，持续给药后很可能产生获得性耐药，所以前瞻性的研究靶向PI3K抗肿瘤药物耐受机制具有重要的意义，不仅能够为可能出现的临床耐受提供应对措施，还能指导PI3K抑制剂的合理使用。 目的： 本课题旨在构建对PI3K亚型选择性抑制剂耐受的人乳腺癌细胞SKBR3，探索靶向PI3K抗肿瘤药物产生获得性耐药的潜在分子机制。寻找基于耐药机制的用药策略，为指导PI3K抑制剂合理应用提供理论与实验依据。 方法： 以本实验室发现的PI3K亚型选择性抑制剂CYH33为工具化合物，在体外采用低浓度逐步加量诱导法作用于人乳腺癌细胞SKBR3，建立CYH33耐药细胞株SKBR3/CYH33。SRB法检测耐药细胞对各种抗肿瘤化合物的敏感性。计算耐药指数。观察并记录亲本和耐药细胞的形态学变化。采用细胞计数法进行细胞增殖曲线绘制和群体倍增时间测定。流式细胞术（FCM）检测亲本和耐药细胞的大小和周期分布。高效液相色谱法检测进入亲本和耐药细胞内CYH33的浓度。采用mRNA微阵列分析筛选出SKBR3及SKBR3/CYH33细胞中差异表达的mRNA。选取与PI3K/mTOR信号通路关系密切且mRNA表达水平差异大的若干个基因，应用实时荧光定量PCR技术进行验证；Western

blotting方法检测亲本和耐药细胞中PI3K下游主要效应分子对CYH33的响应，考察信号通路的改变是否介导细胞耐药。基于耐药机制，采用联合用药方法提高耐药细胞对CYH33的敏感性。实验数据以平均数±标准差（Mean±SD）表示，采用Microsoft 通常 excel软件进行统计分析，组间差异采用t检验，统计结果以P>0.05表示差异无统计学意义，P<0.05表示差异有统计学意义，P
目的：PTEN/PI3K/Akt信号通路在肿瘤发生、发展中的重要作用已受到越来越多的重视，该通路上基因的表达已被证实可成为预测肺癌、子宫内膜癌等肿瘤预后的重要标志。随着我国生活水平的提高，结肠癌发病率逐年上升，故对结肠癌的诊断、治疗及预测预后愈发重要。目前对于结肠癌组织中PTEN/PI3K/Akt通路的研究相对较少，因此本实验通过对于结肠癌及正常结肠组织中PTEN/PI3K/Akt信号通路上PTEN及PI3K表达的分析，讨论PTEN、PI3K与结肠癌各临床病理因素的关系，PTEN、PI3K在结肠癌中表达的差异以及两者的表达与结肠癌预后的相关性，探讨PTEN、PI3K在结肠癌的发生、发展、预后及临床个体化治疗中的作用。

方法：1.选取2008年1月-2011年12月大连医科大学附属第一医院外科术后病理证实的结肠癌组织石蜡标本45例。45例术后结肠癌组织石蜡包埋标本中42例可进行免疫组化实验，具备完整临床病例资料，可纳入实验组。实验组患者术前未进行任何抗肿瘤治疗，术后均接受FOLFOX方案化疗8-12周期，共完成408周期，平均完成10.72个周期。其中左半结肠者30例，右半结肠者12例；男性患者32例，女性患者10例；肿瘤>5cm者21例，≤5cm者21例；年龄37岁-75岁，平均年龄50.5岁，>50岁者37例，≤50岁者5例；高分化7例，中分化21例，低分化14例；有远处转移17例，其中肝转移13例，肺转移3例，腹膜转移1例，无远处转移25例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移19例；未出现化疗副反应不可耐受的病例；随访时间为手术日期至患者复发日期，末次随访时间为：2013年5月。对照组设为42例正常结肠组织。2.检测实验组及对照组中PTEN及PI3K的表达用免疫组织化学二步法。3.统计学分析：将实验数据经SPSS18.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析PTEN、PI3K的阳性表达率与结肠癌临床病理因素的关系及两者不同表达与化疗毒副反应的关系。采用Spearman秩和检验分析PTEN与PI3K在结肠癌中的不同表达有无相关。采用Kaplan-Meier法分析PTEN、PI3K的不同表达与疾病进展时间（TTP）的相关性，用Log-rank检验比较PTEN、PI3K不同表达者的中位TTP差异。检验水准采取双尾α=0.05，P 购买Everolimus 0.05），与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期相关（P 0.05）。 3.42例结肠癌组织中，PTEN阳性表达但PI3K阴性表达为9例，PI3K阳性表达但PTEN阴性表达为13例，PTEN及PI3K同时阳性表达为14例，PTEN、PI3K同时阴性表达为6例。两者的表达呈显著负相关（r=-0.325，P=0.0230.05）。 5.42例结肠癌患者中PTEN阳性表达者的中位TTP为22.17个月，阴性表达者的中位TTP为12.25个月，前者明显高于后者且有统计学意义（χ2=21.429，P=0.0000.05）。 结论： 1.PTEN与结肠癌的发生及疾病进展时间相关，且参与了结肠癌的浸润、转移，有可能作为重要指标评价结肠癌预后。 2.PI3K与结肠癌的发生相关，但与结肠癌的浸润、转移及疾病进展时间无关，与结肠癌预后无相关性。 3.PTEN、PI3K在结肠癌中的表达呈负相关，表明PTEN的缺失可能引起PI3K信号通路的激活，两者均与结肠癌的发生密切相关，可指导结肠癌的个体化治疗。
目’的： 1.研究P13K新型抑制剂BKM120对不同分子分型乳腺癌细胞系及相应干细胞的作用,观察BKM120对不同乳腺癌干细胞生物学特性的影响。 2.

IPO实验IPO干预细胞后Oh、12h、24h分别利用AO-EB法测定细胞平均坏死率,分别观察RSV单独和联合IPO时减轻心肌细胞I/R损伤的作用。 2. RSV联合IPO对p38 MAPK/PPARy/AP-1通路影响IPO后12h,利用Western blotting技术检测p38

MAPK蛋白表达、磷酸化情况,PPARγ、AP-1蛋白表达情况。采用半定量RT-PCR技术检测p38 MAPK、cyclinA2 mRNA表达情况。观察RSV干预后再进行IPO时MAPK信号转导途径的变化。 3. p38 MAPK抑制剂对保护作用及上述通路的影响在以上五组基础上增加RSV+SB+IPO组。RSV+SB+IPO组：给予p38 MAPK抑制剂SB203580 20min, RSV20min,给予IPO。IPO后12h,利用AO-EB法测定细胞平均坏死率,Western blotting技术检测PPARγ、AP-1蛋白表达情况。采用半定量RT-PCR技术检测cyclinA2 mRNA表达情况。观察抑制p38 MAPK对RSV联合IPO的保护作用的影响,以及下游分子PPARγ、AP-1蛋白表达变化。 结果： 1. RSV单独和联合IPO时均可减轻心肌细胞I/R损伤用IPO干预H9c2(2-1)细胞0h、12h、24h后,各时间点IPO组细胞平均坏死率均低于I/R组,差异有显著统计学意义(P<0.05)。PPARy蛋白水平：SB+RSV+IPO组低于RSV+IPO组,差异有显著统计学意义(P<0.05)。AP-1蛋白水平：SB+RSV+IPO组高于RSV+IPO组,差异有显著统计学意义(P
免疫抑制剂具有重要的临床应用价值,广泛应用于器官移植抗排斥反应和自身免疫性疾病的治疗,常见的免疫抑制剂有糖皮质激素、维生素D3、环孢素A、雷帕霉素、它克莫司等。这些免疫抑制剂在临床应用的过程中,在产生治疗效应的同时,也具有一定的副作用,因此,研发新的具有治疗作用的免疫抑制剂意义重大。作为我国传统医学中的瑰宝,中草药对疾病的预防和治疗作用,尤其是对炎症、感染、肿瘤、自身免疫、移植排斥等疾病的预防和治疗作用,主要是通过免疫系统实现的。中药中很可能存在具有免疫抑制作用的成分,发现这些成分并研究其功能具有理论和应用价值。由于树突状细胞(Dendritic

为什么 cells, DCs)是机体免疫应答中的关键细胞,该类细胞也很可能是免疫抑制剂的主要的靶细胞,因此,以DCs作为靶细胞很可能筛选到具有抑制作用的中药成分。鉴于此,我们课题组与第二军医大学药学院张卫东教授课题组合作,利用基于DCs分化发育和功能成熟的药物筛选平台,从496种中药单体化合物中成功筛选出18类31个有效单体成分。并选择对DCs分化发育抑制率较高,而本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的免疫抑制性的丝毛瑞香的提取物Lariciresinol(分子式C20H2106)作为研究对象,深入研究该成分对DCs的调控及其机制；并使用过敏性自身免疫反应性脑脊髓膜炎(EAE)模型研究了其在体内应用的有效性。 LY294002 (一)中药单体化合物Lariciresinol对DCs功能的影响 以本身的细胞毒性较小,且能有效促进DCs分泌IL-10的Lariciresinol成分为研究对象,研究了Lariciresinol对DCs的凋亡诱导作用、对DCs吞噬功能、成熟表型、细胞因子分泌、激发同种异体免疫反应和抗原提呈能力的影响。

我们以GM-CSF和IL-4诱导小鼠骨髓细胞生成DCs,并使用药物处理第五天的未成熟DCs24小时,再用终浓度为100ng／ml的LPS刺激24小时,检测相应指标。使用FACS检测annexinV和PI的方法确定了16nmol／ml为Lariciresinol对未成熟DCs的无毒性浓度范围。后期的研究发现,Lariciresinol不能影响DCs的吞噬和分泌IL-12P70、TNF-α和TGF-β的能力,却能明显促进抑制性细胞因子IL-10的分泌,并能抑制DCs激发同种异体免疫反应(MLR)和特异性抗原提呈能力。 (二)中药单体化合物Lariciresinol促进DCs分泌IL-10的机制 研究 IL-10是一种重要的具有免疫负调节作用的细胞因子。Lariciresinol是如何促进IL-10分泌的呢?进一步实验发现,Lariciresinol对DCs分泌IL-10的促进具有Lariciresinol浓度梯度依赖性和LPS的浓度梯度依赖性。那么,促进的信号通路如何呢?我们采用Western Blot技术,Lariciresinol处理第五天的未成熟DCs 24小时,再加入终浓度为100ng／ml的LPS,并在第0、15、30和60分钟,裂解细胞,收集蛋白检测ERK1／2、p38和JNK的磷酸化情况,发现Lariciresinol能够明显增强ERK1／2的磷酸化；ERK1／2信号通路抑制剂PD98059能够抑制Lariciresinol对DCs的IL-10分泌促进作用,另外,p38信号通路抑制剂SB203580,亦能抑制Lariciresinol促进的IL-10分泌作用。由此,证明了Lariciresinol通过ERK1／2信号通路促进DCsIL-10的分泌,而对P38信号可能具有基础性的活化作用。 而且 (三)中药单体化合物Lariciresinol处理的DCs过继转移和Lariciresinol体内注射均能抑制自身免疫病的发生 既然,Lariciresinol可以明显促进DCs分泌IL-10的能力,并能部分抑制DCs的成熟和抗原提呈能力,那么,Lariciresinol:处理的DCs能否通过诱导免疫耐受而抑制自身免疫病的发生呢?Lariciresinol直接体内注射,又如何呢?本部分研究中,我们通过小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型,对其抑制作用进行了研究。 以MOG35-55多肽作为抗原,辅以腹腔注射百日咳毒素,成功地建立C57BL／6小鼠的EAE模型。其中抗原肽诱导建立的EAE组小鼠发病率达到95%,平均临床打分为3.16±0.

5, 85, 170mg·kg~(-1))和阳性对照秋水仙碱组(Col 0.1 mg?kg~(-1))。HE染色和Masson染色对肝脏组织作病理检查。分光光度法检测血清中转氨酶活性和肝匀浆中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、羟脯氨酸(Hyp)含量;放免法检测血清中透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、IV型胶原(CIV)和层粘蛋白(LN)、前列腺素E2(PGE2)水平;MTT法检测HSC增殖情况;放射性免疫法测定HSC-T6 cAMP水平;采用Western blot技术检测HSC-T6中COX-2、Gαs、Gαi~(-1)、Gαi-2、Gαi-3蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平的变化。 结果: 1. SQDG对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠的保护作用

SQDG对猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠具有明显的保护作用。结果表明,SQDG(85, 170mg·kg~(-1))能显著降低猪血清诱导的免疫性肝纤维化大鼠升高的肝、脾指数,对升高的血清转氨酶有降低趋势,但无显著性意义;病理组织学检查发现,SQDG可降低猪血清诱导的肝纤维化大鼠的纤维化程度,与模型组相比,纤维沉积、肝小叶的破坏等均有所减轻。SQDG还可显著降低纤维化大鼠肝组织Hyp含量,降低血清中HA、LN、PCIII和CIV含量,提示SQDG可以减少纤维化大鼠ECM的生成。 很少 所以 进一步研究发现,SQDG显著降低肝纤维化大鼠肝匀浆中MDA的含量,升高抗氧化酶SOD、GSH-Px活性,改善肝脏氧化状态,还能显著降低肝纤维化大鼠血清中升高的炎性细胞因子PGE2的产生。体外分离大鼠HSC检测其增殖情况,结果表明SQDG可以显著抑制HSC的增殖,SQDG还可以明显抑制模型组肝脏升高的PDGFR-β的表达。提示:抑制氧化应激和致纤维化炎性细胞因子的产生,抑制PDGFR-β的表达从而抑制HSC增殖可能是SQDG抗肝纤维化的部分机制。

2. SQDG对免疫性肝纤维化大鼠MAPK相关蛋白磷酸化和G蛋白表达的影响 在猪血清诱导的免疫性肝纤维化模型大鼠中,肝组织ERK1/2、p38和JNK磷酸化程度增加,肝组织中Gαs的表达明显降低,Gαi-2和Gαi-3的表达明显增加,而Gαi~(-1)的表达没有明显变化。给予SQDG可以明显抑制免疫性肝纤维化大鼠肝组织ERK1/2、p38和JNK磷酸化程度,SQDG还可以明显促进Gαs的表达,抑制Gαi-2和Gαi-3的表达。提示影响MAPK和G蛋白通路的变化可能是SQDG发挥抗肝纤维化作用的重要机制之一。 selleck kinase抑制剂 3. Pae对rrPDGF-BB刺激HSC-T6增殖的影响 体外建立rrPDGF-BB诱导的HSC-T6增殖模型,结果表明Pae在12.5～200mg?L~(-1)浓度范围内明显抑制HSC-T6增殖。进一步观察COX-2在rrPDGF-BB刺激HSC-T6增殖中的作用,结果表明rrPDGF-BB刺激可引起COX-2表达量持续增加,选择性的COX-2抑制剂NS-398可以明显抑制rrPDGF-BB诱导的HSC-T6增殖。Pae(50,

100 mg·L~(-1))可以明显抑制rrPDGF-BB引起的HSC-T6 COX-2表达增加。结果提示抑制COX-2的表达可能是Pae抑制HSC-T6增殖的作用机制之一。 4. Pae对rrPDGF-BB刺激的HSC-T6 ERK1/2信号通路活化的影响 Western-blot检测发现,rrPDGF-BB刺激HSC-T6可引起ERK1/2的迅速磷酸化, Pae(25, 50, 100 mg·L~(-1))可以抑制rrPDGF-BB引起的HSC-T6 ERK1/2的激活,降低p-ERK1/2水平。提示抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6 ERK1/2信号通路的活化是Pae抑制其增殖的主要机制之一。 5. rrPDGF-BB刺激下HSC-T6 G蛋白-AC-cAMP通路的改变及Pae的作用 应用Western-blot方法,检测rrPDGF-BB(50μg·L~(-1))刺激HSC-T6中G蛋白-AC-cAMP通路的改变。结果发现,rrPDGF-BB可以明显促进Gαi~(-1)和Gαi-2蛋白表达水平,但对Gαi-3和Gαs表达无明显影响。同时,rrPDGF-BB可以降低细胞内cAMP水平和PKA活性,促进HSC-T6增殖。Pae(50, 100mg?L~(-1))可明显抑制rrPDGF-BB引起的Gαi~(-1)、Gαi-2的表达升高,提高细胞内cAMP水平。且相关性与回归分析结果表明Pae抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6增殖反应与其提高HSC-T6内cAMP水平密切相关。提示下调HSC-T6 Gαi蛋白的表达是Pae抑制rrPDGF-BB刺激的HSC-T6过度增殖的重要机制之一。 6.

76%),并且可以选择性地抑制PI3Kγ(IC50=0.31μM)。通过流式细胞实验,我们明白了化合物6z抑制T淋巴增殖作用的基本原理,主要是通过诱导激活的T淋巴细胞凋亡,并且6z浓度越大,诱导凋亡作用越强。用AutoDock模拟化合物与PI3Kγ蛋白分子的对接也在分子结构机制上为化合物的生物活性结果提供了一定的支持。因此化合物6z可能是一类有着很好研究前景的以PI3Kγ为作用靶点的免疫抑制剂的先导化合物。
目的：PTEN/PI3K/Akt信号通路在肿瘤发生、发展中的重要作用已受到越来越多的重视，该通路上基因的表达已被证实可成为预测肺癌、子宫内膜癌等肿瘤预后的重要标志。随着我国生活水平的提高，结肠癌发病率逐年上升，故对结肠癌的诊断、治疗及预测预后愈发重要。目前对于结肠癌组织中PTEN/PI3K/Akt通路的研究相对较少，因此本实验通过对于结肠癌及正常结肠组织中PTEN/PI3K/Akt信号通路上PTEN及PI3K表达的分析，讨论PTEN、PI3K与结肠癌各临床病理因素的关系，PTEN、PI3K在结肠癌中表达的差异以及两者的表达与结肠癌预后的相关性，探讨PTEN、PI3K在结肠癌的发生、发展、预后及临床个体化治疗中的作用。

PLX3397订单 方法：1.选取2008年1月-2011年12月大连医科大学附属第一医院外科术后病理证实的结肠癌组织石蜡标本45例。45例术后结肠癌组织石蜡包埋标本中42例可进行免疫组化实验，具备完整临床病例资料，可纳入实验组。实验组患者术前未进行任何抗肿瘤治疗，术后均接受FOLFOX方案化疗8-12周期，共完成408周期，平均完成10.72个周期。其中左半结肠者30例，右半结肠者12例；男性患者32例，女性患者10例；肿瘤>5cm者21例，≤5cm者21例；年龄37岁-75岁，平均年龄50.5岁，>50岁者37例，≤50岁者5例；高分化7例，中分化21例，低分化14例；有远处转移17例，其中肝转移13例，肺转移3例，腹膜转移1例，无远处转移25例；有淋巴结转移23例，无淋巴结转移19例；未出现化疗副反应不可耐受的病例；随访时间为手术日期至患者复发日期，末次随访时间为：2013年5月。对照组设为42例正常结肠组织。2.检测实验组及对照组中PTEN及PI3K的表达用免疫组织化学二步法。3.统计学分析：将实验数据经SPSS18.0软件进行统计学分析。采用χ2检验分析PTEN、PI3K的阳性表达率与结肠癌临床病理因素的关系及两者不同表达与化疗毒副反应的关系。采用Spearman秩和检验分析PTEN与PI3K在结肠癌中的不同表达有无相关。采用Kaplan-Meier法分析PTEN、PI3K的不同表达与疾病进展时间（TTP）的相关性，用Log-rank检验比较PTEN、PI3K不同表达者的中位TTP差异。检验水准采取双尾α=0.05，P

Alectinib 0.05），与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移、肿瘤分期相关（P 0.05）。 3.42例结肠癌组织中，PTEN阳性表达但PI3K阴性表达为9例，PI3K阳性表达但PTEN阴性表达为13例，PTEN及PI3K同时阳性表达为14例，PTEN、PI3K同时阴性表达为6例。两者的表达呈显著负相关（r=-0.325，P=0.0230.05）。

5.42例结肠癌患者中PTEN阳性表达者的中位TTP为22.17个月，阴性表达者的中位TTP为12.25个月，前者明显高于后者且有统计学意义（χ2=21.429，P=0.0000.05）。 结论： 1.PTEN与结肠癌的发生及疾病进展时间相关，且参与了结肠癌的浸润、转移，有可能作为重要指标评价结肠癌预后。 2.PI3K与结肠癌的发生相关，但与结肠癌的浸润、转移及疾病进展时间无关，与结肠癌预后无相关性。 3.PTEN、PI3K在结肠癌中的表达呈负相关，表明PTEN的缺失可能引起PI3K信号通路的激活，两者均与结肠癌的发生密切相关，可指导结肠癌的个体化治疗。
目的：探讨PI3K抑制剂NVP-BEZ235对人急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞的增殖、周期、凋亡及其对Jurkat细胞PI3K-AKT-mTOR信号通路中Akt、p70s6k磷酸化的影响，以期为提高急性T淋巴细胞白血病的临床治疗提供实验基础。 方法：四甲基偶氮唑蓝(MTT)对不同浓度NVP-BEZ235于不同时间点处理后人急性T细胞白血病Jurkat细胞增殖情况的检测,在此基础上采用流式细胞仪检测经NVP-BEZ235处理过后Jurkat细胞周期的变化及Jurkat细胞凋亡率,并采用Western blotting检测Jurkat细胞中PI3K信号通道中Akt、p70s6k磷酸化是否下调。 HTS assay 结果：NVP-BEZ235处理Jurkat细胞后：细胞增殖受到抑制，细胞凋亡率较用药前升高；用流式细胞仪检测处理后的Jurkat细胞，发现凋亡率较未用药的空白组明显增高，并且与药物浓度正相关；用流式细胞仪检测周期，结果示NVP-BEZ235对Jurkat细胞有G1/G0期阻滞；经Western blot方法检测显示NVP-BEZ235导致Jurkat细胞Akt、p70s6k蛋白的磷酸化水平显著降低。 结论：急性T淋巴细胞白血病中存在活化的PI3K信号通路。PI3K/mTOR双重抑制剂NVP-BEZ235为急性T淋巴细胞白血病的靶向治疗提供实验依据。
背景：PI3K家族是一个激酶家族,这个家族是调控磷脂代谢途径以及磷脂源信使分子产生的重要催化酶系,目前相关研究主要集中在Ⅰ型PI3K(下文简称PI3K)。前期研究显示,PI3K在动脉粥样硬化、细胞凋亡、炎症反应中均起到了关键的作用,而这三个因素恰巧是腹主动脉瘤发病机制研究中的重要因素。目前,关于PI3K与腹主动脉瘤关系的研究暂未见报道。 目的：通过检测PI3K在人腹主动脉瘤血清中的表达,探讨PI3K在腹主动脉瘤发病机制中的作用及临床意义。 方法：应用酶联免疫吸附测定技术,分别测定PI3K在24例腹主动脉瘤患者的血清标本中的表达,并与24例正常人血清标本中的PI3K表达进行对照研究。并将腹主动脉瘤组根据性别、年龄、瘤体直径、吸烟史、高血压史、血脂异常等相关因素进行分组研究。 结果：在腹主动脉瘤患者血清中PI3K的表达明显高于正常人群,差异有统计学意义(P=0.015),且与患者的性别、年龄、瘤体直径、吸烟史、高血压史、血脂异常无明显相关(P>0.

05)。在再灌注15min后,Sevo、Post、Sevo+Post血流动力学参数明显高于对照组及其它各组(P＜0.05);但三组间比较,无明显统计学意义。LY、LY+Sevo、LY+Sevo+Post、PD、PD+Sevo、DMSO组在再灌注期血流动力学参数与Control组比较,差异无统计学意义。 2、对心肌梗死面积的影响 在再灌注末,与Control组(43±3%)比较,Post组(28±3%)和Sevo组(31±2%)心肌梗死面积明显减少(P＜0.05)。另外,Post+Sevo组(26±4%)梗死面积也明显减少(P＜0.05),但这三组间差异无统计学意义。虽然LY294002及其溶剂DMSO对梗死面积并无影响(分别为40±3%和43±2%),但是前两者能够取消七氟烷后处理、缺血后处理、七氟烷加缺血后处理对心肌保护作用。LY+Post、LY+Sevo、LY+Post+Sevo各组的梗死面积分别为41±2%、43±3%42±2%,与Control组比较无统计学意义。 PD98059组的情况同LY294002。 3、对磷酸化Akt和GSK3β的影响 和 与Sham组和Control组比较,Sevo组磷酸化Akt和GSK3β的表达明显增加(P＜0.05)。在Post组和Post+Sevo组也可以看到类似的结果(P＜0.05),但这三组间比较无统计学意义。给予LY后,LY、LY+Sevo、LY+Post、LY+Sevo+Post组的磷酸化Akt和GSK3β的表达则明显减少,低于Control组(P＜0.05),但与Sham组比较无统计学意义。DMSO组磷酸化Akt和GSK3β的表达与Control组比较无统计学意义。

4、对磷酸化ERK1/2的影响 与Sham组相比,Control、Post、Sevo、DMSO组p-ERK表达量显著升高(P＜0.05),而PD组和PD+Sevo组p-ERK1/2表达量无统计学意义。与Control组比较,Post组和Sevo组的p-ERK1/2表达量进一步增加(P＜0.05)。但这两组间比较差异无统计学意义。PD组和PD+Sevo组明显低于Control组(P＜0.05)。 Linsitinib临床试验 5、对浆膜下线粒体形态学的影响 电子显微镜下可见,Sham组线粒体形态大都呈椭圆形或圆形,基质密度低,脊排列比较紧密;Control组线粒体高度肿胀,基质密度低,多数外膜因缺血破损,自溶。同Control组比,Post组和Sevo组,线粒体形态比较完整,表现为线粒体数量较多,肿胀减轻,外膜较完整,基质密度增加。形态学半定量分析也表明Sevo组、Post组心肌线粒体损伤程度比对照组Control明显减轻(P＜0.05)。但这两组间差异无统计学意义。PD、PD+Sevo以及DMSO组与Control组比较也无统计学意义。

6、对心肌细胞凋亡的影响 再灌注15min后Sham组未见明显细胞凋亡,心肌细胞凋亡指数仅(4.1±1.1)%。Post组和Sevo组心肌细胞凋亡指数分别为(12.6±2.4)%、(13.8±2.7)%,明显低于Control组的(38.2±9.0)%(P＜0.05),但Post组和Sevo组间比较无统计学意义。 7、对线粒体膜电位的影响 再灌注15min后,Sham组正常鼠心肌细胞线粒体膜电位较高(1.875±0.375),心肌细胞数量也较多。相反,Control组心肌细胞数量显著减少,膜电位明显降低。与Control组(1.149±0.287)比较,Post组(1.534±0.318)和Sevo组(1.507±0.321)膜电位保持在较高水平(P＜0.05),心肌细胞损伤较轻,两组比较无统计学意义。

无 8、对CytC和Caspase-3的影响 与Sham相比,其它各组线粒体CytC水平降低,胞质CytC水平升高(P＜0.05)。与Control组相比,在再灌注末,Post和Sevo组线粒体CytC的水平较高,胞质CytC水平较低(P＜0.05)。但Post和Sevo组的线粒体、胞质中CytC的水平差异无统计学意义。 与Sham相比,在再灌注末,其它各组Caspase-3的表达明显增强(P＜0.05)。而与Control组相比,Post和Sevo组Caspase-3的表达明显减弱(P＜0.05),两组比较差异无统计学意义。 结论 1、七氟烷后处理可以增加大鼠心肌冠脉流量,减少缺血的梗死面积,促进缺血心肌的功能恢复,提高缺血心肌Akt、GSK3β、ERK1/2磷酸化水平,减少细胞线粒体损伤,与缺血后处理的作用相当。PI3K特异性阻断剂LY294002和ERK1/2特异性阻断剂PD98059可以取消七氟烷后处理和/或缺血后处理的保护作用。表明七氟烷后处理不但激活了PI3K途径,而且还激活了ERK1/2途径来发挥保护作用。 2、七氟烷后处理联合缺血后处理对缺血心肌有较好的保护作用,其强度与七氟烷后处理或缺血后处理作单一处理时相当。表明两种后处理联合应用并不增加额外的保护效应。 3、在缺血再灌注过程中,七氟烷后处理抑制缺血心肌线粒体膜电位的下降,阻止线粒体细胞色素C的释放,降低缺血心肌caspase-3活性,减少心肌细胞凋亡。表明七氟烷后处理通过多个位点减少细胞凋亡是其保护缺血心肌的重要机制之一。
原发性高血压(essential hypertension,EHT)是当今社会最常见的心血管疾病,与冠心病、脑卒中、心力衰竭和肾功能障碍密切相关,是导致多种心血管疾病死亡的主要危险因素之一,其患病率在我国有逐年增高的趋势。线粒体病由于突变的线粒体逐渐积累,导致线粒体氧化磷酸化功能受损,细胞功能下降。线粒体tRNA突变是线粒体疾病的研究热点之一。线粒体含有22种tRNA。既往的研究也发现原发性高血压具有家族聚集倾向性,其中一些具有明显母系遗传特点,而且线粒体疾病往往同时表现血压升高,提示我们线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变可能与血压升高有一定的相关性。 我们对2000名原发性高血压患者进行了测序分析,其中发现一个具有典型母系遗传特点的大家系,我们收集了5代104人,其中母系成员27人。我们对家系成员的一般情况、血压等进行测量和统计,对其中42A人进行全身体格检查、采血进行生化和心脏超声检查。结果发现该家系中母系成员高血压患病率高达55.6%,非母系成员高血压患病率15.6%(P＜0.01);母系成员高血压发病年龄有提前的趋势(Ⅱ代62.0±6.2岁;Ⅲ代46.3±5.8岁;Ⅳ代23.3±2.9岁);母系成员血压与年龄、吸烟、饮酒和高盐饮食有明显相关性(P＜0.05);母系成员血糖、总胆固醇、血钠明显高于非母系成员(P＜0.

5组Smad2、TGF-β1、RORγt、Foxp3 mRNA水平均增高(P
研究背景和目的肝癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,每年新发现的病人约70万,其中半数发生在我国。发病率高、死亡率高及有效治疗手段的缺乏使深入研究肝癌发病机制、探寻防治新靶点显得极为迫切。绝大多数肝癌病人都有肝纤维化、肝硬化的病史。而肝纤维化是肝脏损伤的一种高度保守的反应,发生在几乎所有与肝细胞死亡相关的疾病中。肝纤维化的病因包括病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝、酒精性脂肪肝、胆汁阻塞性疾病和肝脏自身免疫性疾病等。肝纤维化是一个多细胞反应性疾病,其中肝星状细胞发挥最主要的作用,产生约90%的细胞外基质。肝纤维化晚期发展为肝硬化,而肝硬化具有很高的癌变风险,相当一部分最终发展为肝癌。因此,探寻肝纤维化的治疗手段和发现新的干预靶点具有同样重要的临床意义。HLF(Hepatic Leukemia Factor)的发现源于E2A-HLF融合基因的克隆。E2A-HLF是由t(17;19)(q22;p13)易位形成的融合基因(19号染色体短臂13区的E2A基因与17号染色体长臂22区的HLF基因融合),最早发现于儿童前体B细胞急性淋巴细胞白血病(B cell precursor acute lymphoblastic leukemia);当时通过Northern-blot检测发现,HLF的表达仅限于肝细胞和白血病细胞中,因此将其命名为肝细胞白血病因子。后续的研究还发现,HLF属于脯氨酸和酸性氨基酸含量丰富的碱性亮氨酸拉链(proline

and acidic amino acid-rich basic leucine zipper,PAR bZIP)转录因子家族成员；该转录因子家族另外两个成员是白蛋白-D位点结合蛋白(albumin selleck D-site-binding protein, DBP)和毒性当量因子(thyrotroph

embryonic factor,TEF)。HLF通过形成同型二聚体或与其他PAR bZIP家族成员形成异型二聚体的方式,结合靶基因启动子区特异的DNA序列并激活转录。PAR bZIP转录因子家族与细胞的生物节律密切相关。研究表明,PAR bZIP家族蛋白DBP、TEF和HLF的同时缺失,会导致小鼠寿命缩短,出现心肌肥大、低血压、低醛固酮等症状,并易发生癫痫而死亡。前期研究发现HLF与造血干细胞的分化和功能有关,在造血系统的恶性肿瘤中发挥重要的作用,同时它还参与肝脏的代谢。但HLF在肝纤维化和肝癌中的作用未见报道。因此,本课题将系统研究HLF在肝纤维化和肝癌发生发展中的作用及分子机制,并结合临床资料探讨其作为肝纤维化和肝癌干预靶点及预后标志物的可行性。研究方法：1.鉴定并繁殖HLF组成性转座敲除小鼠,建立CCl4及胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化模型,与对照组比较,研究HLF调控肝纤维化的作用；2.利用HLF转座敲除小鼠建立DEN诱导的小鼠肝癌模型,通过与对照组小鼠相比较,研究HLF调控肝癌发生的作用；3.构建过表达和干扰HLF的质粒,并利用慢病毒系统建立稳定过表达及干扰HLF的肝癌细胞系SMMC-7721 micro -HLF、MHCC-LM3 micro -HLF、97H micro-HLF、SMMC-7721 flag -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞系；4. SMMC-7721 micro -HLF、MHCC-LM3 micro -HLF、97H micro -HLF、 SMMC-7721 flag -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞系分别采用CCK-8实验、细胞周期检测、平板克隆实验、划痕实验、Invasion chamber迁移和侵袭实验观察过表达及干扰HLF后对肝癌细胞生长和转移等生物学特性的影响；5.将MHCC-LM3 selleck kinase抑制剂 micro

-HLF及其对照细胞分别接种裸鼠皮下,观察HLF对肝癌细胞体内增殖能力的影响；6.将97H micro -HLF、MHCC-LM3 flag -HLF及其对照细胞分别进行裸鼠尾静脉注射,建立小鼠肝癌肺转移模型,观察HLF对肝癌细胞体内转移能力的影响。7.分离HLF组成性转座失活小鼠及对照小鼠原代肝星状细胞,利用CCK-8实验、划痕实验等方法观察HLF对肝星状细胞活化的影响;8.构建过表达HLF的腺病毒,感染人肝星状细胞系LX-2,采用CCK-8实验、细胞周期检测、Transwell实验等方法,观察过表达HLF对肝星状细胞增殖、迁移、分泌等生物学特性的影响；9.利用Realtime-PCR, western-blot、免疫共沉淀、表达谱芯片、ChIp-seq等方法研究HLF对c-Jun、p21和IL-6/STAT3及PTEN/Akt等信号通路的调控；10.利用RT-PCR, western-blot及免疫组化等方法检测肝纤维化临床样本中HLF的表达情况并运用统计学方法分析HLF的表达与临床病人肝纤维化程度的相关性；11.利用RT-PCR, western-blot及免疫组化等方法检测肝癌临床组织样品中HLF的表达情况并运用统计学方法分析HLF的表达与临床病理和预后资料的相关性。研究结果：1.以CCl4和胆管结扎诱导的小鼠肝纤维化为模型,我们研究发现与野生型小鼠相比较,HLF敲除小鼠的肝纤维化明显减轻。2.分离原代小鼠肝星状细胞进行试验我们发现,与野生型小鼠相比HLF敲除小鼠肝星状细胞的增殖、迁移和分泌能力显著下降。3.将表达HLF的腺病毒感染肝星状细胞后进行RT-PCR、western blot和免疫组化检测发现,HLF可通过调控IL-6/STAT3信号通路促进肝纤维化。4.机制研究的结果还发现,肝星状细胞中HLF的表达受TGF-3调控。5.通过对带有详细病理资料的人肝纤维化组织进行HLF的western-blot及免疫组化检测并评分发现,HLF的表达与肝纤维化的程度呈正相关。6.利用经典的DEN诱癌模型我们发现,HLF敲除组小鼠肝癌发生率明显降低,形成肿瘤的数量和体积也显著低于对照组小鼠,提示HLF对肝癌发生具有促进作用。7.通过对DEN诱癌小鼠的肝癌与癌旁组织进行表达谱芯片分析发现,与对照小鼠相比,HLF敲除小鼠的肝脏癌组织中AP-1家族的表达差异最大,western Palbociclib订单 blot检测的结果验证了这一发现,这提示HLF可能通过调控c-Jun促进肝癌的发生。8.在肝癌细胞中过表达或干扰HLF后进行增殖、周期、平板克隆形成及裸鼠荷瘤实验发现,HLF可促进肝癌细胞增殖和裸鼠成瘤能力。9.在肝癌细胞中过表达或干扰HLF后进行划痕实验、Transwell、Invasion chamber、裸鼠肺转移检测,结果发现HLF可促进肝癌细胞的体内外迁移和侵袭的能力。10.通过对过表达HLF肝癌细胞系及其对照细胞系进行免疫共沉淀、westernblot蛋白电泳、RT-PCR以及裸鼠皮下荷瘤及裸鼠肺转移灶上的免疫组化染色分析发现,HLF可通过调控p21信号通路促进肝癌细胞的增殖,通过调控PTEN/AKT信号通路促进肝癌细胞的转移。11.

7倍(P＜0.05),氟伐他汀和缬沙坦治疗组CTGFmRNA表达分别下降20%,28%(P＜0.05),联合治疗组下降35%(P＜0.05)。

5、Western blot印迹检测结果:糖尿病组大鼠心肌组织TGF-β1、CTGF蛋白表达较正常对照组明显增加,作为ECM的主要成分胶原蛋白Ⅰ和胶原蛋白Ⅲ表达明显增加(P＜0.01);各个治疗组胶原蛋白表达均有所下降(P＜0.05),联合治疗组优于单独治疗组。 获悉更多 结论: 1、CTGFmRNA和TGF-β1过度表达,参与了糖尿病大鼠心肌纤维化的过程,导致左室舒张功能的异常。 2、缬沙坦和氟伐他汀均能够抑制CTGF及TGF-β1的表达,使得Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原合成明显减少,抑制心肌纤维化,从而改善心功能。两药联合治疗对糖尿病心肌组织起到协同保护作用。
前言 缺血再灌注(ischemia/reperfusion;Ⅰ/R)损伤是组织器官在缺血的基础上恢复血流后损伤反而加重的现象,是内、外科常见的一种损伤。肠道对缺血最敏感的组织器官之一,肠缺血再灌注常见于严重创(烧)伤、休克、感染、肠移植、新生儿缺血坏死性肠炎及危重病患者,肠缺血再灌注(intestinalischemia/reperfusion;Ⅱ/R)常常原发或继发性肠道疾病,是临床众多疾病的病理生理基础,是引发脓毒症及多器官功能衰竭的始动因素之一。缺血再灌注肠损伤后肠黏膜屏障功能受损,通透性增加,促使肠道细菌及内毒素移位、大量氧自由基生成、炎性细胞浸润增加,细胞因子和炎症介质的失控性释放,不仅引起肠道局部损伤,而且造成远隔器官损害,尤其是肺损伤,诱发全身炎症反应综合症及多器官功能衰竭,病情凶险、严重,在临床上具有极高的发病率和病死率。由于肠缺血再灌注肠损伤在各类临床疾病中均可能原发或继发性发生,对于其发病机制的探讨一直是学者们的研究热点。

丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases;MAPKs)是真核细胞内一组高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶,目前已知MAPKs有c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号蛋白激酶(ERK)和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)三种主要形式。在损伤应激、氧自由基、感染和炎症等刺激条件下,细胞内MAPKs蛋白的苏氨酸/酪氨酸双位点磷酸化反应从而被顺序激活,通过细胞内信号传递级联效应使基因表达发生变化,在调节组织炎症反应、细胞增殖与凋亡和免疫反应等病理生理过程发挥重要作用。由于各种MAPK本身和其作用底物各有特点,MAPKs三个主要成员成具有相对独立而又相互联系的信号传递网络,三种形式的MAPKs执行不同的生理功能。有研究表明,MAPKs参与了缺血再灌注肠损伤的发病过程,但是,在肠缺血再灌注早期,有关MAPKs蛋白表达及活化过程尚不清楚,MAPKs蛋白及其下游信号通路参与肠缺血再灌注损伤的机制尚未阐明。采用夹闭肠系膜上动脉方法造成小鼠肠缺血再灌注损伤,本实验第一部分观察损伤后肠组织MAPKs及其下游信号通路的变化,探讨小肠组织MAPKs活化及其介导凋亡信号通路在小鼠小肠缺血再灌注损伤中的可能作用。 Selleck Cyclopamine 肺脏不仅是气体交换的器官,也是一些细胞因子和激素生与灭活的场所,经过各种途径入血的毒素、内源性炎性介质等物质经静脉回流后都要进入肺循环,加上肺脏本身在解剖结构上相对较脆弱,肺循环具有面积大、流速慢、压力低的特点,使肺脏实质细胞暴露在毒性物质的机会和时间增加,因此,在诸多脏器中,肺脏最易受到各种致病因素的打击,也是机体失控炎性损害的主要靶器官之一。尽管目前对肠缺血再灌注肺损伤进行大量的研究,但是其分子机理尚未完全阐明。肠缺血再灌注导致肠粘膜损,肠屏障功能破坏,引起细菌/内毒素移位,氧自由基、细胞因子及炎性介质等有害物质释放并进入全身循环,导致远隔器官损害;同时,它们又都是刺激MAPKs信号通路活化的有力因素。我们由此推测,肠缺血再灌注可能通过激活肺组织MAPKs信号通路活化,参与肠缺血再灌注肺损伤的发生。肺损伤特征性主要表现为肺部剧烈炎症反应,炎症细胞浸润和炎性细胞因子合成、释放增加,其中细胞因子TNF-α、IL-1β在肺组织炎症反应中起着关键作用。第二部分通过观察p38 MAPK信号通路活化在肠缺血再灌注肺损伤的活化过程,使用特异性p38 MAPK抑制剂SB239063抑制p38 MAPK蛋白活性,探讨其在小肠缺血再灌注肺损伤中的作用及可能机制。 第一部分MAPKs蛋白活化在小肠缺血再灌注损伤的作用

目的:观察小肠缺血再灌注后小肠组织MAPKs蛋白活化过程及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和活化型Caspase-3的变化,探讨MAPKs活化及其介导凋亡信号通路在小肠缺血再灌注损伤中的可能作用。 方法:采用夹闭肠系膜上动脉(superior mesenteric artery;SMA)后再灌注造成小肠缺血再灌注损伤小鼠动物模型,经腹腔注射1%戊巴比妥钠50mg.kg~(-1)麻醉。(1)8-10周龄的雄性C57 BL/6小鼠随机分为肠缺血30min、40min、50min和60min,每组8只,观察14d内肠缺血再灌注后小鼠生存率。(2)小鼠随机分为假手术组(sham),肠缺血再灌注处理组(Ⅱ/R):分再灌注即刻(0)、0.5h、1h、4h、6h和12h不同再灌注时间组。夹闭SMA 已经 40min再灌注造成小鼠Ⅱ/R模型,假手术组同样进行开腹手术但不夹闭动脉。假手术后及肠缺血再灌注后不同时间相处死小鼠取小肠标本,回肠组织10%中性福尔马林液固定待病理检查,用Chiu双盲病理评分,评价肠损伤情况程度;原位末端标记(TUNEL)法对肠组织凋亡细胞进行定位检测;全细胞裂解法提取小肠总蛋白,Western blot蛋白免疫印迹法检测小肠组织JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,磷酸化JNK、ERK和p38 MAPK蛋白,以及与凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3、Bcl-2和Bax表达水平,以磷酸化MAPKs蛋白代表其活化水平。 结果:(1)肠缺血30 min小鼠生存率100%,随着肠缺血时间的增加,动物生存率逐渐降低,肠缺血60 min动物生存率仅约30%。(2)肠组织大体表现及病理评分结果均显示,肠缺血40 min后再灌注早期肠损伤严重,尤以再灌注1h肠组织病理损伤最重,至12h肠组织结构基本恢复正常;TUNEL法定位凋亡细胞结果表明,凋亡细胞分布广泛,包括黏膜、黏膜固有层,黏膜下层,甚至肌层均存在凋亡细胞,涉及细胞成分多样,以肠上皮细胞凋亡为主。肠缺血再灌注损伤细胞凋亡与坏死并存。(3)肠缺血再灌注早期促凋亡的活化型caspase-3蛋白表达增加,与假手术组比较,再灌注0.5h、1h小肠组织活化型caspase-3明显增加(P＜0.01),与小肠组织病理损害时相过程基本一致,同时抗凋亡Bcl-2蛋白明显下调(P＜0.