1mM NaOH 0.5ml。每组各30只新生大鼠,于出生24h处死新生大鼠,10只取心脏血以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法检测血清心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTn I),心肌组织用于分离线粒体,以荧光分光光度计检测MPTP开放度、线粒体ψm、ROS;10只取心肌组织切片以TTC染色方法检测心肌缺血面积;10只取心尖组织制作石蜡切片及超薄切片,以HE染色及电镜观察心肌细胞及线粒体形态变化、以免疫组化染色方法检测心肌组织AIF表达量。结果以均数±标准差( x±s)表示,采用SPSS for Windows 13.0统计软件进行资料分析。 结果 对照组、窒息组、二氮嗪组、格列苯脲组、溶剂组新生大鼠血清cTnI分别为0.08±0.04、0.40±0.29、0.10±0.04、0.33±0.17、0.34±0.20(

Selleck TG101209 g/L)(P<0.01),窒息组明显升高,二氮嗪干预后下降,格列苯脲组、溶剂组与窒息组相近。各组新生大鼠心肌组织切片以TTC染色观察心肌缺血面积,对照组、窒息组、二氮嗪组、格列苯脲组、溶剂组新生大鼠心肌缺血面积分别为8.01±3.48、42.50±15.90、14.79±3.98、31.51±20.86、28.37±14.36(%)(P<0.01),窒息组出现心肌点状坏死,二氮嗪干预后心肌缺血情况有所好转,接近正常组,格列苯脲组、溶剂组与窒息组相近。以HE染色观察新生大鼠心肌细胞损伤的病理改变,窒息组心肌细胞排列紊乱、细胞肿胀、部分细胞溶解,二氮嗪干预后心肌细胞肿胀有所减轻、排列好转,但尚未达正常,格列苯脲组及溶剂组结果与窒息组相近,格列苯脲抑制二氮嗪作用,溶剂对结果无影响。电镜观察窒息组心肌细胞核固缩、核崩解,线粒体空泡变性、外膜破裂、内膜肿胀,二氮嗪干预后线粒体空泡变性减少、线粒体肿胀较窒息组好转,格列苯脲组及溶剂组与窒息组结果相近。对照组、窒息组、二氮嗪组、格列苯脲组、溶剂组新生大鼠心肌组织AIF阳性细胞比例分别为:9.70±3.06、77.50±11.81、44.60±17.49、70.70±14.36、73.60±15.19(%)(P
成瘾物质引起的中毒性脑病常见于阿片类药物、酒精等物质成瘾的人群,主要表现为成瘾(包括依赖、耐受和戒断行为)及中枢神经系统器质性损害。患者逐渐出现记忆力减退、反应迟钝等认知功能障碍表现,部分患者可出现严重的人格改变,或出现以错构或虚构为特征的感知觉障碍及头痛、脑血管意外等。随着我国经济的快速发展,罹患该类疾病的患者急剧增加,但医疗和社会的忽视与这种现象形成了尖锐的矛盾。

吗啡是目前临床应用最为广泛的成瘾物质之一,研究报道,吗啡可以引起多个系统和器官的细胞坏死和凋亡。以往体内和体外研究发现,吗啡处理引起神经元凋亡。胶质细胞以往认为仅仅是大脑的支持细胞,最近研究发现在阿片类物质依赖性和耐受性的形成和维持当中发挥重要作用。其中小胶质细胞代表中枢神经系统固有的免疫防御体系,被认为中枢神经系统的主要免疫细胞。阿片样受体在阿片样物质效应中发挥关键作用,在小胶质细胞中已经鉴定存在全部三种阿片样受体,包括μμ、δ和κ受体。最近研究发现,吗啡处理可以引起小胶质细胞凋亡,纳洛酮(一种阿片受体阻滞剂)可以阻滞吗啡引起的小胶质细胞凋亡,但其具体分子机制仍然未知。 http://www.selleck.cn/btk.html 丝氨酸/苏氨酸激酶Akt调节细胞活化,炎症反应和凋亡。激活的Akt可以调控细胞增殖和凋亡通路上的多种蛋白而发挥抗凋亡作用。激活的Akt磷酸化PI3K通路上的一些底物蛋白,如糖原合成酶激酶-3β(GSK3β)等。GSK3β是可以被Akt在丝氨酸9位点磷酸化而灭活其蛋白活性的组成性活性酶。GSK3是细胞增殖和凋亡的重要调控点。大量证据表明,GSK3调控线粒体内源性凋亡途径和死亡受体介导的外源性凋亡途径的关键步骤。已经有研究报道Akt/GSK3β在吗啡诱导的神经元凋亡中发挥重要作用。但Akt/GSK3β在小胶质细胞中具体作用仍未知。P38

MAPK是MAPK家族中的重要组成部分,在细胞凋亡、炎症、应激反应和转录调节中发挥重要作用。最近研究发现吗啡处理可以引起脊髓背根神经节神经元中的磷酸化p38水平升高。而P38特异性抑制剂SB203580可显著降低吗啡止痛过程中的耐受性。P38 MAPK可以通过上调Bcl-2家族成员促凋亡蛋白Bax而促进细胞凋亡,但p38 通常 MAPK在吗啡引起的小胶质细胞凋亡中的作用仍然未知。P-arrestins是一组多功能支架和接头蛋白,广泛表达分布于体内各种细胞,是G-protein-coupled receptors(GPCRs)信号途径的关键的负性调控分子和支架蛋白。最近研究证实P-arrestins介导抗凋亡信号通路,P-arrestins可通过调控Akt信号通路在生长因子受体介导的细胞增殖中发挥作用。但是,P-arrestins在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用仍然未知。 为此,我们使用临床最常用的成瘾性物质,吗啡作用于体外原代培养小胶质细胞及BV-2小胶质细胞系,探讨了GSK3、p38 MAPK和β-arrestins信号通路在吗啡诱导小胶质细胞凋亡中的作用,以此深入研究成瘾物质引起中毒性脑病的发病机制。本研究分四个部分： 第一部分吗啡激活并诱导小胶质细胞凋亡作用的研究 目的 使用体外培养原代小胶质细胞和BV-2小胶质细胞系,观察吗啡处理后小胶质细胞激活和凋亡的相关变化,从而初步探讨吗啡对小胶质细胞的作用。 方法 1.