通过ELISA检测方法分别测定血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平及IFN-γ、IL-4细胞因子水平,三免后测定小鼠脾脏细胞中CD4~(+)、CD8~(+)的含量,对试验数据进行统计分析。结果显示,Prime-Boost策略组接种的小鼠血清中抗猪附红细胞体特异性抗体、IgG_(1)、IgG_(2a)抗体水平均显著高于Ad5-M/enoCX-4945核磁重组腺病毒疫苗组(P<0.05),极显著高于pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.01)。Prime-Boost策略组的IL-4与IFN-γ细胞因子水平、CD4~(+)与CD8~(+)水平显著高于Ad5-M/eno疫苗组和pVAX1-eno核酸疫苗组(P<0.05)。试验结果表明与猪附红细胞体Ad5-M/eno,PVAX1-eno单疫苗相比,采selleck HPLC控制用Prime-Boost免疫策略更能显著提高小鼠体液免疫水平与细胞免疫水平。
A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是一种新发传染病病原。研究旨在对SVA的衣壳蛋白VP1进行原核表达,并制备其多克隆抗体。以SVA广西分离株SVA-GX01(GenBank No. MK039162)RNA为模版,通过RT-PCR扩增结购买C59构蛋白VP1基因,构建重组质粒pET-32a-VP1并转化表达菌株大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达。在非变性条件下,将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。纯化的多克隆抗体进行间接Elisa测定效价,同时进行Western blot与间接免疫荧光分析。结果表明,重组蛋白pET-32a-VP1在大肠杆菌BL21(DE3)以可溶性与包涵体两种形式表达,分子量约为49 kDa。纯化后多克隆抗体效价高达1 64 000。