研究KA致痈后大鼠海马神经元兴奋和星形胶质细胞反应的变 化; 2.研究KA致痈后大鼠海马MAPKs(ERK，p38 MAPK，州K)活性的 变化规律; 3.研究阻断p38 MAPK的激活，对KA致痈后大鼠海马神经细胞可 能具有的保护性作用及机制; 一5- 4.研究阻断p38 MApK的激活，对KA作用后的培养大鼠海马神经 元可能具有的保护性作用及机制; 5.研究KA作用对大鼠海马脑片CAI区突触递质的影响及机制。 本实验分五部分探讨红藻氨酸致痛大鼠海马p38M连pK活性变化及对海 马神经细胞结构和电生理的影响 第一部分红藻氨酸致痛后大鼠海马神经元和星形胶质细胞的 反应性变化及机制 以往认为星形胶质细胞(astrocyte，AsT)仅仅起支持、营养和保护作

用，对癫痈的研究主要以神经元作为出发点，而对动物致痈后脑组织AST 变化的研究甚少。本实验采用右侧脑室立体定向微量注射红藻氨酸(kaha。 acid，KA)癫痈大鼠模型，采用Fos和GFAP免疫组织化学染色方法，在 海马切片上动态同步观察反应神经元和星形胶质细胞的数量和形态的变 化。 方法: 1·SD雄性大鼠50只，体重200士209，随机分为3组:①实验组(n =36)，分别设致痛后30min、lh、Zh、6h、12h和24h共6个时间点， 每个时间点6只;②假手术组(n=12)，取相同时间点，每个时间点2只; ③正常组(n=2)。 2.实验组以右侧脑室立体定向微量注射KA(0 .05%，溶于生理盐水) 3川制作癫?
急性冠脉综合征(acute coronary syndromes,ACS)，如不稳定性心绞痛和心肌梗死，是造成冠心病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)患者死亡的主要原因。ACS的发生，通常是由于动脉壁不稳定粥样斑块的破裂和血栓形成造成的。深入揭示影响粥样斑块稳定性的危险因子，将有利于阐明ACS形成的机制，而且将会为ACS的临床诊断和治疗提供新的线索。基质金属蛋白酶(matrix

selleck metalloproteinases,MMPs)是锌依赖性蛋白酶家族，能通过降解细胞外基质蛋白而参与CHD的发生发展。因此，MMPs活性的改变可能影响心血管病的危险性。本课题初步探讨了基质金属蛋白酶与动脉粥样硬化斑块稳定性的关系，研究内容主要包括以下几个方面： 一、以体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞为细胞模型，观察有多种潜在的致动脉粥样硬化效应的oxLDL对巨噬细胞源MMP-9表达和分泌的影响。将不同浓度的LDL和铜离子氧化的LDL分别作用于培养的巨噬细胞。以RT-PCR分析检测MMP-9的mRNA表达水平。明胶酶谱法检测培养液上清中的分泌的MMP-9活性。以Western

点击此处 blot检测MMP-9分泌蛋白量。 实验结果：与对照组相比较，20mg/L oxLDL组和50mg/L oxLDL组的细胞培养液中92 kD和72 kD处明胶酶活性均增加，尤其以MMP-9酶活性增加明显。Western blot结果显示，oxLDL处理组细胞培养液中MMP-9蛋白量显著增加，且有浓度依赖性。oxLDL刺激6 h后，巨噬细胞MMP-9 mRNA表达量呈浓度依赖性增加，50mg/L oxLDL组为对照组的2.65倍。LDL(80mg／L)对MMP-9表达及活性无显著影响。 二、观察oxLDL及其主要活性组成成分之一，溶血卵磷脂(Lysophosphatidylcho-line, Histone Demethylase assay LysoPC)，对体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞MMP-12表达和分泌的影响，并且从蛋白激酶ERK(extracellular signal-regulated kinase)路径部分揭示oxLDL诱导MMP-12表达的胞内信号传导机制。 实验结果：β-酪蛋白酶谱显示，正常对照组巨噬细胞条件培养基中几乎检测不到任何酶解条带，oxLDL组则出现22 kD、29 kD两条酪蛋白降解透亮带(MMP-12活性形式)。酶谱上未见54Kd的MMP-12酶原条带。oxLDL显著诱导了MMP-12酶蛋白分泌及活性，并可能同时促使MMP-12酶原形式转换为活性形式。oxLDL刺激6h后， MMP一12 mRNA表达量呈浓度依赖性增加，50m叭oxLDL组为对照组的6.64倍。 LDL(80mg/L)对MMp一9和MMp一12的表达及活性无诱导作用。非毒性浓度(10一20 林m。比)LysoPC对巨噬细胞培养液上清MMP一12活性及MMP一12 mRNA表达量没 有显著影响。由此可以推测，oxLDL对MMP一12的诱导作用可能与LysoPC无关。 为进一步探讨oxLDL诱导MMP一12表达的细胞内信号传导机制，本研究中观察 了。xLDL及LysoPC分别刺激培养的小鼠巨噬细胞后，细胞内的细胞外信号调节激酶 (extraeellular signal一re罗lated kinase，ERK)、e一un氨基末端激酶(e一un NHZ一terminal kinase，JNK)和p38蛋白激酶的磷酸化水平的变化。结果显示，正常细胞上述激酶的 磷酸化程度低;经LysoPC刺激后，ERK、JNK和p38M妙K三种激酶均被激活，以 P38 MAPK磷酸化水平变化幅度最大;经oxLDL刺激后，只有ERK和p38 MApK两 种激酶被激活，磷酸化水平变化幅度都较大;其中，ERK的活化信号明显增强，并且 呈浓度依赖性，ERKI和ERKZ磷酸化水平分别较基础值增加5.7壮0.9、10.6肚1.