林格氏液洗脱、聚乙烯吡咯烷酮-40(Polyvinyl Pyrrolidone-40,PVP-40)洗涤液除杂以及裂解液和多种酶联合破壁是改进SDSCTAB法获得该类专一性样本高质量微生物总DNA的关键步骤。
为建立生牛乳中白色念珠菌和近平滑念珠菌的快速检测方法,根据GeBelnacasan核磁nBank已公布的基因序列分别设计2种念珠菌的种特异性引物,采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法检测目标菌的基因组DNA,并进行特异性、敏感性和重复性试验,用该方法对含有目标菌的生牛乳样本进行检测。结果表明,该方法特异性强,与对照菌株光滑念珠菌、克柔念珠点击此处菌、热带念珠菌和烟曲霉等病原真菌无交叉反应;灵敏度高,对白色念珠菌和近平滑念珠菌的最低检出量均为10 CFU/mL;重复性好,T_m值和Ct值变异系数分别在0.1%和2.5%之内。该方法操作简便、耗时短,2 h～3 h即可完成整个检测过程。建立的方法能用于生牛乳SGC-CBP30半抑制浓度中白色念珠菌和近平滑念珠菌的一次性快速、准确和定量检测。
表观遗传是指在DNA序列不变的情况下基因表达发生变化的现象。表观遗传现象与外界环境条件的变化紧密相关,它参与植物的生长发育、胁迫响应、衰老死亡等重要生命过程并在其中起到了关键作用。表观遗传学作为一门新兴学科在近20年间得到了快速发展,成为当前动植物和医学领域的研究热点。