01）。 3.5左归丸含药血清活化JNK和p38MAPK信号通路有助于磷酸化Smad2/3和上调ColI蛋白表达 结果显示，与control组比较，ZG和BML均能显著诱导MC3T3-E1细胞Smad2/3蛋白磷酸化和上调ColI蛋白表达水平（P＜0.01）；对p-Smad2的诱导作用，ZG组显著优于BML组（P＜0.01），对ColI蛋白表达的上调作用，ZG组优于BML组（P＜0.05），对p-Smad3的诱导作用，两组比较无统计学意义（P>0.05）；加入SP600125或SB203580后，显著抑制ZG和BML对MC3T3-E1细胞Smad2/3蛋白磷酸化的诱导作用（P＜0.01），显著抑制ZG对MC3T3-E1细胞ColI蛋白表达的上调作用（P＜0.01），加入SP600125后显著抑制BML诱导的ColI蛋白表达（P＜0.01），加入SB203580后抑制BML诱导的ColI蛋白的表达（P＜0.05）。

3.6左归丸含药血清干预Smad4、Runx2和ColI mRNA表达作用及JNK和p38MAPK通路对其影响 结果显示，与control组比较，ZG和BML均能显著上调MC3T3-E1细胞Smad4、Runx2和ColI mRNA的表达（P＜0.01）；对Smad4和Runx2mRNA表达诱导作用ZG组与BML组比较无统计学意义（P>0.05），对ColI mRNA诱导作用ZG组显著优于BML组（P＜0.01）；加入SP600125后，对ZG诱导Smad4和Runx2mRNA表达的抑制作用没有统计学意义（P>0.05），可以显著抑制ZG诱导的ColI

没有 一般 mRNA表达（P＜0.01），对BML诱导的ColI mRNA表达的抑制作用没有统计学意义（P>0.05），可以抑制BML诱导的Smad4和Runx2mRNA的表达（P＜0.05或P＜0.01）；加入SB203580后，对ZG诱导Smad4mRNA表达的抑制作用没有统计学意义（P>0.05），可以显著抑制ZG诱导的Runx2和ColI mRNA表达（P＜0.01），对BML诱导的Smad4mRNA表达的抑制作用没有统计学意义（P>0.05），可以抑制BML诱导的Runx2和ColI mRNA的表达（P＜0.05或P＜0.01）。 结论： 1.左归丸含药血清具有诱导MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化作用。 2.JNK、p38MAPK/Smads信号级联参与MC3T3-E1细胞的增殖与分化。 3.左归丸含药血清可能部分通过活化JNK和p38MAPK通路调控MC3T3-E1细胞功能。 4.左归丸含药血清可能部分通过对JNK、p38MAPK/Smads信号级联的调节而达到促骨形成作用。
细菌性脓毒症及其伴随的严重的并发症是临床常见的、威胁生命的疾病。而所有这些并发症的一个共同点就是内皮细胞损伤和功能障碍。肺微血管内皮细胞（PMVECs）是肺组织的重要实质细胞，在肺损伤过程中既是首位受损伤的靶细胞，又是活跃的炎症细胞和效应细胞，在疾病发生发展中起关键作用。因此，深入探讨PMVECs损伤机制在肺循环疾病的研究中至关重要。 感染尤其是革兰氏阴性菌脓毒症是急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）等肺循环疾病的主要病因。细菌脂多糖（LPS）作为革兰阴性杆菌外膜上的一种糖蛋白，在体内可引起强烈的炎症反应，直接或间接损伤PMVECs，在感染性ALI/ARDS的病理过程中起关键作用。炎性刺激下PMVECs损伤的调控机制涉及复杂的信号转导途径。研究发现，在ALI/ARDS、肺动脉高压、肺癌等疾病的发生发展中均有RhoA/Rho激酶（ROCK）信号通路的参与。RhoA/ROCK通路作为体内普遍存在的一条信号通路，在细胞的信号转导过程中起着信号转换器或分子开关的作用，能够诱发肌动蛋白细胞骨架重排、调控基因转录及细胞周期进程等。然而，RhoA/ROCK通路在LPS诱导的大鼠PMVECs损伤中的调节机制以及与其他信号通路的交叉反应尚需进一步研究。因此，本实验以LPS诱导大鼠PMVECs损伤为模型，观察RhoA/ROCK通路在PMVECs损伤中的变化。并通过细胞免疫化学、流式细胞术、激光共聚焦及细胞分子生物学等技术研究ROCK抑制剂法舒地尔对LPS诱导的大鼠PMVECs损伤的影响，深入探讨其下游信号转导机制。第一部分RhoA/ROCK通路参与LPS诱导的大鼠肺微血管内皮细胞损伤

因为 目的：研究RhoA/ROCK通路在LPS诱导的大鼠PMVECs损伤中的变化及可能机制。 方法：组织贴块法原代培养大鼠PMVECs，Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色及透射电镜观察细胞超微结构鉴定大鼠PMVECs；MTT及乳酸脱氢酶（LDH）法测定PMVECs细胞活力；RT-PCR检测RhoA、ROCK1mRNA的表达；Western blot检测MYPT1磷酸化水平。 结果：1PMVECs体外培养及鉴定 采用组织贴块法并加以改良成功培养出大鼠PMVECs，去除组织块继续培养3~5天后，基本形成细胞单层，汇合呈典型的铺路鹅卵石状排列。VIII因子相关抗原免疫细胞化学染色表明，约95%的细胞表现为阳性。电镜结果表明：多数细胞均可观察到质膜突起，即微绒毛；在细胞浆中还观察到W-P小体；另外有大量的质膜小泡（又称吞饮小泡）存在于细胞浆内，上述结构符合典型的内皮细胞超微结构特征。结合我们的取材部位为肺外边缘组织，因此可以证实分离培养的细胞的确为肺微血管内皮细胞。2LPS对大鼠PMVECs细胞生长的影响及法舒地尔的干预作用 MTT实验结果表明：与对照组（OD值为0.95±0.12）相比，0.01、0.1、1μg/ml LPS对大鼠PMVECs生长没有明显影响；而10、100μg/ml LPS处理组OD值分别降为0.75±0.19（P <0.05或P<0.